Peli-1基因單核苷酸多態(tài)性及其mRNA水平與系統(tǒng)性紅斑狼瘡的相關(guān)性研究.pdf

1、研究背景：
　　系統(tǒng)性紅斑狼瘡（Systemic lupus erythematosus，SLE），是一種好發(fā)于女性的慢性自身免疫性疾病，其臨床表現(xiàn)較為復(fù)雜，病程遷延反復(fù)，常常累及多個系統(tǒng)和器官。近年來，國內(nèi)外大量研究致力于探索SLE的病因和發(fā)病機制，但其確切的機制尚未完全明了。目前一般認為其發(fā)病涉及遺傳因素、環(huán)境因素、內(nèi)分泌狀況等多種因素，這些因素相互影響、相互作用，構(gòu)成一個復(fù)雜的病因網(wǎng)，引起異常免疫反應(yīng)，如炎癥因子釋放、自身抗

2、體產(chǎn)生。SLE最初被認為是B細胞介導(dǎo)的自身免疫性疾病。隨著研究的深入，T細胞被發(fā)現(xiàn)在 SLE的發(fā)生、發(fā)展過程中也起著至關(guān)重要的作用。
　　1999年科學(xué)家首次在果蠅體內(nèi)發(fā)現(xiàn)一種高度保守的E3泛素化連接酶蛋白，命名為Pellino（簡稱Peli）蛋白。該種泛素化連接酶蛋白家族一共有Peli-1、Peli-2、Peli-3三種亞型，其最值得一提的功能特征是在先天性免疫中承擔(dān)多元性角色。最新研究發(fā)現(xiàn) Peli-1在參與 TLR/IL-1

3、R介導(dǎo)的一系列細胞信號傳導(dǎo)起著一定的調(diào)節(jié)作用。Peli-1還參與介導(dǎo)TRIF依賴的NF-κB活化。此外，Chang等發(fā)現(xiàn)Peli-1是維持T細胞耐受的一個關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子，其功能異?？赡軐?dǎo)致T細胞激活，從而可能在SLE等自身免疫性疾病的發(fā)病中起重要作用。
　　基于以上內(nèi)容，本課題首次探討Peli-1基因多態(tài)性與SLE的疾病易感性之間的關(guān)聯(lián)；同時檢測Peli-1 mRNA表達水平及其與SLE易感性和SLE不同表型之間的相關(guān)性，從基因轉(zhuǎn)錄

4、、表達水平分別探討Peli-1基因與SLE發(fā)病之間的關(guān)系。
　　第一部分 Peli-1基因單核苷酸多態(tài)性與系統(tǒng)性紅斑狼瘡的相關(guān)性研究
　　目的：比較SLE患者于正常對照Peli-1 rs329498、rs10496105等位基因和基因頻率的差異，探討其與SLE遺傳易感性的關(guān)聯(lián)。并結(jié)合臨床資料，分析Peli-1 rs329498、rs10496105與其主要臨床特征及其實驗室指標之間的關(guān)系。
　　方法采用病例對照的研究方

5、法，選取738名SLE患者和827名健康對照。采用Fluidigm192.24基因分型技術(shù)檢測Peli-1基因中rs329498、rs10496105兩個SNP位點，對其基因型、等位基因頻率等進行分析，并結(jié)合臨床資料進一步分析基因頻率分布于臨床表現(xiàn)之間的關(guān)系。
　　結(jié)果：
　?。?）Peli-1基因rs329498位點多態(tài)性與SLE的關(guān)聯(lián)性研究
　　SLE患者組AA、AC、CC的基因型頻率分別為40.8％、44.6%、

6、14.6%，對照組分別為36.5%、45.5%、18.0%，兩組差異無統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=4.63，P=0.099）。等位基因比較顯示兩組差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=4.80，P=0.028），相對大等位基因A，小等位基因C會降低SLE發(fā)病的風(fēng)險（OR=0.851,95%CI:0.737-0.983）。但遺傳顯性、隱性模型均未見統(tǒng)計學(xué)關(guān)聯(lián)（均有P>0.05）。與非LN腎炎組患者相比，LN患者A等位基因頻率較高，且差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=8.1

7、8，P=0.017）。小等位基因C相比于A等位基因，其LN發(fā)病風(fēng)險OR值為0.681（95%CI:0.528-0.880）。兩組顯性模型基因型頻率（CC+AC versus AA）分布差異有統(tǒng)計學(xué)意義（OR=0.632,95% CI:0.451-0.884，P=0.007）。臨床特征關(guān)聯(lián)性分析顯示Peli-1基因rs329498位點可能與顴部紅斑有關(guān)，其基因型頻率分布有統(tǒng)計學(xué)差異（χ2=6.63，P=0.036）。
　　（2）Pe

8、li-1基因rs10496105位點多態(tài)性與SLE的關(guān)聯(lián)性研究
　　位點rs10496105基因型頻率GG、AG、AA在病例組分別為70.0%、26.2%和3.8%，對照組中分別為69.4%，27.2%和3.4%。病例組與對照組基因型頻率分布無統(tǒng)計學(xué)差異（χ2=0.37，P=0.832）。遺傳模型分析結(jié)果表明，無論是顯性模型還是隱性模型病例組和對照組分布均未發(fā)現(xiàn)統(tǒng)計學(xué)差異（均有P>0.05）。此外，LN組與非LN組間基因型分布差異

9、無統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=3.11，P=0.201）。臨床資料分析結(jié)果顯示rs10496105位點與顴部紅斑、盤狀紅斑、光敏感、口腔潰瘍、關(guān)節(jié)炎等主要臨床特征也無統(tǒng)計學(xué)關(guān)聯(lián)（均有P>0.05）。
　　結(jié)論：
　　中國漢族人群中Peli-1 rs329498基因多態(tài)性與SLE遺傳易感性有一定關(guān)聯(lián)，此外，rs329498位點也與狼瘡腎炎及顴部紅斑有關(guān)。而未發(fā)現(xiàn)rs10496105基因多態(tài)性位點與SLE之間的統(tǒng)計學(xué)關(guān)聯(lián)。
　　第二

10、部分 Peli-1 mRNA水平與系統(tǒng)性紅斑狼瘡的相關(guān)性研究
　　目的：分別比較SLE患者組和正常對照組、SLE患者中狼瘡腎炎組與非狼腎炎組以及活動組與非活動組外周血單個核細胞（Peripheral blood mononuclear cells，PBMCs）中Peil-1基因mRNA表達水平，并探討其表達水平與臨床特征、實驗室指標以及疾病活動度之間的關(guān)系。
　　方法：共收集31例SLE患者和30例健康對照。采用Trizol

11、法提取PBMCs中的RNA。實時定量聚合酶鏈反應(yīng)（Real time quantitative polymerase chain reaction，RT-PCR）檢測PBMCs中的Peli-1基因mRNA表達水平，利用Mann-Whitney秩和檢驗比較各組之間mRNA水平是否存在差異。采用Spearman相關(guān)分析Peli-1基因mRNA表達水平與系統(tǒng)性紅斑狼瘡疾病活動指數(shù)（Systemic lupus erythematosus di

12、sease activity index，SLEDAI）關(guān)系。所有數(shù)據(jù)均采用SPSS17.0進行統(tǒng)計分析。
　　結(jié)果：
　?。?）PBMCs中Peli-1 mRNA表達水平比較：31例SLE患者與30例對照組PBMCs中的Peli-1 mRNA水平無統(tǒng)計學(xué)差異（Z=-0.404，P=0.686）。將SLE患者分為腎炎組（11例）和非腎炎組（20例）比較，結(jié)果顯示兩組PBMCs中的Peli-1 mRNA水平無統(tǒng)計學(xué)差異（Z=-

13、0.619，P=0.536）。此外，活動組（19例）和非活動組（12例）組間的 PBMCs中的Peli-1 mRNA水平無統(tǒng)計學(xué)差異（Z=-0.973，P=0.330）。
　　（2）SLE患者 PBMCs中Peli-1 mRNA水平與其臨床特征關(guān)聯(lián)性分析：Mann-Whitney秩和檢驗結(jié)果顯示，各組之間Peli-1 mRNA水平差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（均有P>0.05）。
　?。?）SLE患者PBMCs中Peli-1 mRNA

14、水平與實驗室指標關(guān)聯(lián)性分析：各個實驗室指標陽性組與陰性組間Peli-1 mRNA水平差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（均有P>0.05）。
　?。?）SLE患者PBMCs中Peli-1 mRNA表達水平與SLEDAI相關(guān)性分析：Spearman等級相關(guān)分析結(jié)果顯示，SLE患者PBMCs中Peli-1 mRNA水平與SLEDAI評分之間無明顯相關(guān)性（rs=0.148，P=0.428）。
　　結(jié)論：
　　本研究發(fā)現(xiàn)SLE患者與健康對照組