Fractalkine-CX3CR1在大鼠骨癌痛中的作用及其脊髓機(jī)理.pdf

1、第一部分：骨癌痛大鼠脊髓CX3CR1表達(dá)的變化 目的： 觀察脊髓趨化因子受體CX3CR1在骨癌痛大鼠中的表達(dá)變化，探討其在骨癌痛中的作用。 方法： 雌性未交配SD大鼠50只，隨機(jī)分為5組，每組10只。對照(C)組、假手術(shù)(S)組、骨癌痛6天(B6)組、骨癌痛12天(B12)組、骨癌痛18天(B18)組。C組不給予任何處理，S組和B6、B12、B18組分別在左脛骨上端注射Hank's液和Walker256乳

2、腺癌細(xì)胞5μl。各組分別于術(shù)前1 d(基礎(chǔ)值)、術(shù)后6、12、18 d測定機(jī)械性痛閾值和雙后肢負(fù)重差。C組和S組于術(shù)后18d，B6、B12、B18組于術(shù)后6、12、18 d各隨機(jī)處死10只大鼠，取L4～L6脊髓組織，6只大鼠采用免疫組化法計(jì)數(shù)CX3CR1陽性細(xì)胞，另外4只大鼠采用Western blot法測定CX3CR1蛋白表達(dá)水平。 結(jié)果： 與C組和S組比較，B6、B12、B18組各時(shí)點(diǎn)機(jī)械性痛閾值下降(P<0.01)

3、，左側(cè)后肢負(fù)重下降，雙后肢負(fù)重差升高(<0.01)；脊髓CX3CR1陽性細(xì)胞數(shù)和蛋白表達(dá)水平升高(P<0.01)。與B6組比較，B12、B18組機(jī)械性痛閾值下降(P<0.01)，左側(cè)后肢負(fù)重下降，雙后肢負(fù)重差升高(P<0.05)；脊髓CX3CR1陽性細(xì)胞數(shù)和蛋白表達(dá)水平升高(P<0.05)。而B12組和B18組比較，機(jī)械性痛閾值、雙后肢負(fù)重差，及脊髓CX3CR1陽性細(xì)胞數(shù)和蛋白表達(dá)水平差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。 結(jié)論：

4、 脊髓趨化因子受體CX3CR1表達(dá)上調(diào)參與了大鼠骨癌痛的產(chǎn)生和維持。 第二部分：鞘內(nèi)注射CX3CR1抗體對骨癌痛大鼠機(jī)械痛閾的影響及其脊髓機(jī)理 目的： 觀察鞘內(nèi)注射趨化因子Fractalkine(FKN)受體CX3CR1的中和抗體對骨癌痛大鼠痛覺過敏的影響，并通過脊髓膠質(zhì)細(xì)胞的變化探討Fractalkine的脊髓部位作用機(jī)理。 方法： 采用Walker256乳腺癌細(xì)胞，注射在脛骨上端建立骨

5、癌痛模型。雌性SD大鼠40只，隨機(jī)分為5組(n=8)，Ⅰ組(Hank's液對照組)；Ⅱ組(骨癌痛組)；Ⅲ組：對照組+CX3CR1中和抗體；Ⅳ組：骨癌痛組+IgG；Ⅴ組：骨癌痛組+CX3CR1中和抗體。術(shù)后第10～12天，鞘內(nèi)分別注射CX3CR1抗體或IgG，1次/d，劑量10μg/10μl。分別于術(shù)前及術(shù)后隔日開始測定大鼠機(jī)械性痛閾值。術(shù)后第12天鞘內(nèi)注射抗體后6h處死大鼠，測定脊髓小膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物(OX-42)和星形膠質(zhì)細(xì)胞膠質(zhì)纖維酸

6、性蛋白(GFAP)的表達(dá)水平。 結(jié)果： 術(shù)后第10天，Ⅲ組與Ⅰ組比較，Ⅳ與Ⅱ組比較，大鼠單次鞘內(nèi)注射抗體后機(jī)械性痛閾值均無明顯變化(P>0.05)：與Ⅳ組比較，Ⅴ組鞘內(nèi)注射CX3CR1抗體后2～8 h機(jī)械性痛閾值顯著增高(P<0.01)。術(shù)后第10～12天，與Ⅰ組比較，Ⅱ組、Ⅳ組機(jī)械性痛閾值下降(P<0.01)，Ⅲ組上述指標(biāo)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；與Ⅱ組、Ⅳ組比較，Ⅴ組機(jī)械性痛閾值顯著增高(P<0.01)。與Ⅰ