脊髓背角T細(xì)胞死亡相關(guān)基因8在大鼠骨癌痛中的作用.pdf

1、第一部分：骨癌痛大鼠脊髓背角T細(xì)胞死亡相關(guān)基因8的表達(dá)變化
　　 目的：觀察骨癌痛大鼠脊髓背角T細(xì)胞死亡相關(guān)基因8(Tcelldeath-associatedgene8，TDAG8)的表達(dá)變化。
　　 方法：雌性SD大鼠64只，體重150～180g，隨機(jī)分為3組：正常對照組(I組，n=8)、假手術(shù)組（Ⅱ組，n=8）和骨癌痛組(Ⅲ組，n=48)。Ⅰ組不做任何處理，Ⅱ組于左側(cè)脛骨骨髓腔內(nèi)注射生理鹽水10μl，Ⅲ組于左側(cè)脛骨骨

2、髓腔內(nèi)接種Walker256乳腺癌腫瘤細(xì)胞（1×107個/ml）10μl建立骨癌痛模型。Ⅰ組、Ⅱ組、Ⅲ組于接種前1天（基礎(chǔ)狀態(tài)）及接種后第1、3、6、9、12、15、18天各取8只測定左后肢機(jī)械縮足閾值(mechanicalwithdrawlthrehould，MWT)。Ⅰ組、Ⅱ組大鼠于接種腫瘤后第18天處死，Ⅲ組大鼠于接種腫瘤前1天及接種腫瘤后第6、9、12、15、18天各處死8只，取大鼠L4～6脊髓，免疫組化染色測定脊髓背角TDAG

3、8表達(dá)。在第18天取4只已處死的Ⅲ組大鼠，進(jìn)行X線攝片，觀察大鼠雙側(cè)脛骨上段骨質(zhì)破壞情況。
　　 結(jié)果：接種腫瘤后18天，Ⅲ組大鼠左側(cè)脛骨上段骨質(zhì)明顯破壞，說明模型建造成功。與Ⅰ組、Ⅱ組及自身基礎(chǔ)值相比，Ⅲ組接種腫瘤后第6～18天左后肢MWT降低，脊髓背角TDAG8陽性細(xì)胞計數(shù)升高，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。
　　 結(jié)論：脊髓背角TDAG8可能參與了大鼠骨癌痛的形成。
　　 第二部分：鞘內(nèi)注射小干擾RN

4、A對骨癌痛大鼠痛行為學(xué)和脊髓背角TDAG8表達(dá)的影響
　　 目的：觀察鞘內(nèi)注射小干擾RNA(smallinterferingRNA，siRNA)后，骨癌痛大鼠痛行為學(xué)及脊髓背角TDAG8表達(dá)的變化。
　　 方法：雌性SD大鼠40只，體重150～180g，隨機(jī)分為5組：正常對照組(Ⅰ組，n=8)、骨癌痛組（Ⅱ組，n=8）、siRNA組（Ⅲ組，n=8）、陰性對照組(Ⅳ組，n=8)和轉(zhuǎn)染試劑組（Ⅴ組，n=8）。Ⅰ組不做任何處理

5、，Ⅱ組、Ⅲ組、Ⅳ組、Ⅴ組均建立骨癌痛模型。Ⅲ組、Ⅳ組、Ⅴ組在接種腫瘤同時行鞘內(nèi)置管，并于接種Walker256腫瘤細(xì)胞后第6天開始分別鞘內(nèi)注射siRNA、錯配的siRNA以及siRNA的轉(zhuǎn)染質(zhì)粒，劑量均為3μg/10μl，連續(xù)給藥3天，每天一次。各組大鼠于接種前1天（基礎(chǔ)狀態(tài)）及接種后第1、3、6、9測定左后肢MWT。于接種腫瘤后第9天處死所有大鼠，取大鼠L4～6脊髓，免疫組化染色測定脊髓背角TDAG8表達(dá)。
　　 結(jié)果：與Ⅱ組