趨化因子配體21在骨癌痛大鼠脊髓的表達(dá)及其作用.pdf

1、目的：探討趨化因子配體21(CCL21)在骨癌痛大鼠脊髓的表達(dá)及其作用。
　　方法：第一部分：健康雌性SD大鼠42只，體重160～180g，采用隨機(jī)數(shù)字表法，將大鼠隨機(jī)分為7組(n=6)：正常組(naive組)、假手術(shù)組(sham組)、骨癌痛3天組(BCP3)、骨癌痛7天組(BCP7)、骨癌痛14天組(BCP14)、骨癌痛21天組(BCP21)、骨癌痛28天組(BCP28)。分別于術(shù)前1d，術(shù)后1、3、5、7、14、21、28d測(cè)

2、定大鼠接種側(cè)后肢的機(jī)械縮足反射閾值(PMWT)；采用蘇木素一伊紅(hematoxylin-eosin，HE)染色法觀察各組大鼠接種側(cè)脛骨的病理變化；采用免疫印跡法檢測(cè)各組大鼠脊髓CCL21的表達(dá)水平。
　　第二部分：健康雌性SD大鼠18只，體重160～180g，采用隨機(jī)數(shù)字表法，將大鼠隨機(jī)分為三組(n=6)：正常組(naive組)、假手術(shù)組(sham組)、骨癌痛組(BCP組)。分別于術(shù)前1d，術(shù)后1、3、5、7、14d測(cè)定大鼠接種

3、側(cè)后肢的機(jī)械縮足反射閾值(PMWT)，采用HE染色法觀察各組大鼠接種側(cè)脛骨的病理變化；采用免疫熒光技術(shù)觀察各組大鼠脊髓CCL21的表達(dá)部位。
　　第三部分：健康雌性SD大鼠56只，體重160～180g，采用隨機(jī)數(shù)字表法，將其隨機(jī)分為7組(n=8)：假手術(shù)組(Ⅰ組)、假手術(shù)+溶媒PBS組(Ⅱ組)、假手術(shù)+CCL21中和抗體組(Ⅲ組)、骨癌痛組(Ⅳ組)、骨癌痛+溶媒PBS組(Ⅴ組)、骨癌痛+對(duì)照IgG組(Ⅵ組)和骨癌痛+CCL21中和

4、抗體組(Ⅶ組)。Ⅳ組、Ⅴ組、Ⅵ組和Ⅶ組采用脛骨骨髓腔內(nèi)注射Walker-256乳腺癌細(xì)胞制備脛骨癌痛模型，Ⅰ組、Ⅱ組和Ⅲ組骨髓腔內(nèi)注射等體積生理鹽水，各組于建模后第14天觀察大鼠脛骨的影像學(xué)表現(xiàn)。其中Ⅴ組、Ⅵ組和Ⅶ組于注射Walker-256乳腺癌細(xì)胞后第14天經(jīng)L5～6蛛網(wǎng)膜下腔分別注射溶媒。PBS15μl、親和純化的正常羊IgG10μg/15μl和CCL21中和抗體組10μg/15μl；Ⅱ組和Ⅲ組于相同時(shí)點(diǎn)經(jīng)L5～6蛛網(wǎng)膜下腔分別注

5、射溶媒PBS15μl、CCL21中和抗體組10μg/15μl。于注射Walker-256乳腺癌細(xì)胞或生理鹽水前1d(Z0，即基礎(chǔ)值)、注射Walker-256乳腺癌細(xì)胞或生理鹽水后1、3、5、7、14d(Z1-5)及給藥后0.5、1、2、4、8、12、24、48h(T1-8)時(shí)測(cè)定大鼠接種側(cè)后肢的機(jī)械縮足反射閾值(PMWT)。
　　結(jié)果：(1)疼痛行為學(xué)：造模后第7、14、21、28天，骨癌痛大鼠接種側(cè)后肢PMWT降低(P<0.0

6、5)；病理學(xué)表現(xiàn)：造模后第7、14、21、28天，骨癌痛大鼠接科側(cè)脛骨可見(jiàn)明顯的骨結(jié)構(gòu)破壞；免疫印跡：與假手術(shù)組相比，骨癌痛7、14、21、28d組脊髓CCL21表達(dá)上調(diào)(P<0.05)。(2)疼痛行為學(xué)：造模后第7、14天，骨癌痛大鼠接種側(cè)后肢PMWT降低(P<0.05)；病理學(xué)表現(xiàn)：造模后第14天，骨癌痛大鼠接種側(cè)脛骨可見(jiàn)明顯的骨結(jié)構(gòu)破壞；免疫熒光染色法：CCL21與癌細(xì)胞接種后肢同側(cè)的脊髓背角神經(jīng)元存在共表達(dá)。(3)影像學(xué)表現(xiàn)：建

7、模后第14天，骨癌痛大鼠接種側(cè)脛骨可見(jiàn)明顯骨結(jié)構(gòu)破壞；疼痛行為學(xué)：與Ⅰ組比較，Ⅱ組和Ⅲ組PMWT差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；骨癌痛各組(Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ和Ⅶ組)大鼠PMWT在術(shù)后第7天下降(P<0.05，P<0.01)。與Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ組比較，Ⅶ組大鼠在鞘內(nèi)給藥后2hPMWT升高(P<0.05)，在8h達(dá)到峰值(P<0.01)；與Ⅳ、Ⅴ組比較，Ⅵ組鞘內(nèi)給藥后PMWT差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　結(jié)論：1.脛骨癌痛大鼠脊髓水平