脛骨癌痛大鼠脊髓水平細胞外信號調(diào)節(jié)蛋白激酶5的表達及其作用.pdf

1、目的：探討脊髓水平細胞外信號調(diào)節(jié)蛋白激酶5(ERK5)在骨癌痛大鼠中的表達及其作用。
　　方法：采用大鼠脛骨癌痛模型。選擇雌性SD大鼠，體重160g-180g。實驗一:56只大鼠采用隨機數(shù)字表法將其分為7組(n=8):對照組（C組）、假手術(shù)組(S組)和骨癌痛3天組(BCP3組)、骨癌痛5天組(BCP5組)、骨癌痛7天組(BCP7組)、骨癌痛14天組(BCP14組)、骨癌痛21天組(BCP21組)。分別于術(shù)前1d，術(shù)后1、3、5、7

2、、14和21d時，測定機械性刺激閾值及自由行走痛行為學(xué)評分。BCP各組大鼠脛骨骨髓腔內(nèi)注射Walker-256乳腺癌細胞混懸液，制備大鼠脛骨癌痛模型;S組大鼠脛骨骨髓腔內(nèi)注射等容量生理鹽水;C組大鼠不作任何處理。S組于接種后14d、模型組于接種后7d、14d和21d時行大鼠脛骨X線攝片觀察腫瘤誘發(fā)的骨破壞情況。采用Western-blot法檢測各組大鼠脊髓p-ERK5、ERK5及Fos蛋白表達。
　　實驗二:雌性SD大鼠56只，隨

3、機分為7組(n=8)，假手術(shù)組（Ⅰ組），假手術(shù)+ BIX0218810μg/10μl（Ⅱ組）、骨癌痛組（Ⅲ組）、骨癌痛+溶媒DMSO組(Ⅳ組)、骨癌痛+ BIX021880.1μg/10μl組（Ⅴ組）、骨癌痛+BIX021881.0μg/10μl組（Ⅵ組）、骨癌痛+ BIX0218810μg/10μl組（Ⅶ組）。Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ組采用脛骨骨髓腔內(nèi)注射Walker-256乳腺癌細胞制備脛骨癌痛模型，Ⅰ、Ⅱ組骨髓腔內(nèi)注射等體積生理鹽水。Ⅰ

4、、Ⅲ組造模后不給予藥物處理，其余各組于造模后14天分別鞘內(nèi)注射DMSO（Ⅳ組）、BIX021880.1μg/10μl（Ⅴ組）、1.0μg/10μl(Ⅵ組)、BIX0218810μg/10μl（Ⅱ組、Ⅶ組）。行為學(xué)測定:各組隨機取8只大鼠，在術(shù)后第14d分別于給藥前、給藥后0.5、1、2、4、8、12、24h測定大鼠機械縮足反射閾值(MWT)。各組隨機取4只大鼠于鞘內(nèi)給藥后4h取脊髓L4-5節(jié)段，采用Western-blot法檢測脊髓水平

5、p-ERK5、ERK5及p-CREB蛋白表達。
　　結(jié)果：實驗一(1)C組和S組大鼠機械縮足反射閾值和行走痛行為學(xué)評分在術(shù)后各時間點組內(nèi)比較差異無顯著性;與C組和S組相比，BCP組接種后7d、14d、21d時機械性刺激痛閾下降，其中第14d時MWT最低;而自由行走痛行為學(xué)評分逐漸升高。(2)與C組相比，術(shù)后5d、7d、14d、21d組脊髓水平p-ERK5表達上調(diào)(P＜0.05);同時脊髓Fos蛋白表達也上調(diào)，其變化趨勢與p-ERK

6、5的表達變化大致相同，但脊髓水平ERK5表達變化無顯著差異。(3)影像學(xué)表現(xiàn):造模后第14d、21d，骨癌痛大鼠接種側(cè)脛骨可見明顯的骨結(jié)構(gòu)破壞。
　　實驗二(1)行為學(xué)結(jié)果:與Ⅰ組相比，鞘內(nèi)給予BIX02188對Sham組（Ⅱ組）MWT沒有影響，骨癌痛各組14 d時MWT顯著降低(P＜0.05)。與給藥前比較，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ組各時點MWT差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，Ⅵ組大鼠在給藥后1h時MWT開始升高，在4h作用達到高峰

7、，持續(xù)至給藥后8h，Ⅶ組大鼠在給藥后0.5h時MWT開始提高，至4h時作用達到高峰，持續(xù)至給藥后12h。與骨癌痛組（Ⅲ組）比較，Ⅵ組、Ⅶ組在給藥后1、2、4、8hMWT明顯升高，而Ⅳ組、Ⅴ組MWT無統(tǒng)計學(xué)意義。
　　(2) Western-blot結(jié)果顯示:與Ⅰ組（sham組）相比，骨癌痛各組p-ERK5及p-CREB表達明顯升高(P＜0.05);與Ⅲ組相比，給藥后4h，Ⅵ、Ⅶ組p-ERK5和p-CREB表達明顯降低(P＜0.05

8、)，而Ⅳ、Ⅴ兩組，p-ERK5和p-CREB表達無顯著性差異。各組間ERK5表達無顯著差異。BIX02188對骨癌痛的抑制作用隨給藥劑量的增加而增強。
　　結(jié)論：1.脛骨癌痛大鼠脊髓水平p-ERK5表達明顯上調(diào);同時Fos蛋白表達也上調(diào)，其變化趨勢與p-ERK5的表達變化大致相同。2.鞘內(nèi)給予BIX02188可以減輕骨癌痛大鼠的機械痛覺過敏，作用高峰在給藥后4h，并能夠降低脊髓p-ERK5及p-CREB的表達，提示ERK5-CRE