Walker256乳腺癌肉瘤細胞構建大鼠脛骨骨癌痛模型.pdf

1、本文選用大鼠的Walker256乳腺癌肉瘤細胞構建成大鼠脛骨骨癌痛模型。并對接種后動物的致瘤率和痛敏行為進行了評估，對其骨結構的破壞進行了影象學和組織病理切片分析，還對患側脊髓切片星形膠質細胞的激活進行了免疫組化的分析。結果如下： 1．手術后大鼠的患瘤率： 接種Walker256腫瘤細胞的大鼠共52只，其中觀察到有腫瘤細胞生長的為35只，患瘤率為67.3％。有7只大鼠在實驗過程中出現(xiàn)不可預見性的突然死亡，不能進行實驗觀察

2、，最后有痛行為學表現(xiàn)且進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計的大鼠共28只。占總數(shù)的53.8％。 2.接種成功的腫瘤大鼠的生長狀態(tài)和腫瘤生長特征： 這28只大鼠在接受接種手術后的前2周生長狀態(tài)良好。85％的大鼠從PID15-18 天開始，陸續(xù)出現(xiàn)不愿讓患側后肢負重的情況，表現(xiàn)為患肢足外翻現(xiàn)象。還有15％的大鼠出現(xiàn)這種情況較晚，在PID的19-21天出現(xiàn)。盡管每只大鼠出現(xiàn)痛行為學改變的時間不同，但一旦出現(xiàn)，其以后的痛行為表現(xiàn)都比較接近。大鼠出現(xiàn)足外

3、翻現(xiàn)象后，不久接種部位的組織出現(xiàn)腫脹，其后4-6天出現(xiàn)輕度惡液質，接下來惡液質明顯加重，最終因惡液質嚴重全身衰竭死亡或盆腔、腹腔廣泛轉移而死亡。90％的大鼠從出現(xiàn)痛敏到死亡的時間為6-9天，10％的為10-12天。 3 接種成功的腫瘤大鼠放射影像學結果： 在PID的第5天，腫瘤組和sham組的X光片沒有觀察到脛骨骨質有任何破壞的表現(xiàn)。在第17天，sham組的評分為0分，腫瘤組的平均評分為1.5，在PID 26天時，sha

4、m組的評分仍為0，腫瘤組的平均評分為4。 同一只大鼠動態(tài)的比較了其在PID5、17、26天的影像學差異，同時在PID26天，還進行了接種側和對側的骨質的影像學比較。在第5天，骨質沒破壞，在PID17天，腫瘤細胞向外侵蝕，出現(xiàn)明顯的骨皮質破壞征象。隨著腫脹的加劇，到PID26天，影像學資料顯示整個骨結構發(fā)生明顯改變和破壞。 4 接種成功的腫瘤大鼠接種側脛骨腫瘤組織病理學結果： Sham組的接種側脛骨結構正常。而腫瘤

5、組HE染色見腫瘤細胞充滿骨髓腔，正常骨結構破壞嚴重。 5 接種成功的腫瘤大鼠痛行為學評估結果： 5.1 大鼠正常走動痛行為學評分結果： 正常組和sham組的大鼠在觀察期中，手術側后肢的走動痛行為評分無變化，都為0分。而腫瘤組大鼠隨著腫瘤細胞的生長，局部組織腫脹明顯，痛行為學評分越來越高。 5.2 接種成功的腫瘤大鼠熱痛敏結果： 正常組和sham組的大鼠在觀察期中，手術側后肢和對側后肢對輻射熱刺激無

6、改變。而腫瘤組在早期，無統(tǒng)計學改變，但當出現(xiàn)患側后足明顯不負重時，會出現(xiàn)明顯的的熱痛超敏期，持續(xù)2-3天。雖然不同的大鼠出現(xiàn)此期的時間不盡相同，但是幾乎所有有痛敏表現(xiàn)的大鼠均出現(xiàn)明顯的熱痛覺超敏期。 過了熱超敏期，大鼠患側的PWL值在相同熱刺激下值有所上升，但仍比基礎值低，且有統(tǒng)計學差異。在腫瘤大鼠的終末期，90％的大鼠處在不吃不動的狀態(tài)，反應遲鈍，沒有正常鼠在新環(huán)境下的探索行為。這個時期測得的PWL值和基礎值無統(tǒng)計學差異。

7、 5.3 接種成功的腫瘤大鼠機械痛敏的結果： 機械痛敏的結果沒有熱痛敏那么顯著。Sham組和normal組在機械痛敏上沒有統(tǒng)計學差異。腫瘤組的機械痛敏出現(xiàn)的時間短，伴隨著熱痛超敏期，有統(tǒng)計學差異。但隨后的數(shù)據(jù)沒有明顯的統(tǒng)計學差異。 6 癌痛誘導脊髓星形膠質細胞激活： 觀察顯示，normal組和sham組大鼠脊髓背角星形膠質細胞形態(tài)正常，GFAP有低到中等程度的基礎表達。而腫瘤組，在早期，脊髓星形膠質細胞活性無

8、明顯變化，但在痛敏產生后，其表達較高，患側脊髓全層均呈現(xiàn)強烈的GFAP免疫陽性反應，以背角淺層為最高。 由以上結果得出如下結論： 1、用Walker256乳腺癌肉瘤細胞可以構建成功大鼠脛骨骨癌痛模型； 2、由于個體免疫狀態(tài)和腫瘤細胞的不同，接種腫瘤細胞于脛骨骨髓腔后，患瘤率為67.3％，排除不明原因死亡，真正可以進行統(tǒng)計的為53.8％； 3、放射影象學和組織病理學數(shù)據(jù)顯示痛行為學的改變和正常骨結構的破壞密