惡性瘧原蟲海南株氯喹抗性相關(guān)基因多態(tài)性及msp3等位基因分型研究.pdf

1、瘧疾廣泛流行至今仍無法得到很好控制的原因主要有以下幾點(diǎn)：出現(xiàn)抗藥性蟲株和對(duì)殺蟲劑產(chǎn)生抗性的媒介蚊蟲，缺乏適當(dāng)有效的瘧疾疫苗等。瘧疾流行導(dǎo)致大量人口死亡，能夠引發(fā)嚴(yán)重的社會(huì)經(jīng)濟(jì)問題，幾乎成為所有熱帶和亞熱帶國家的沉重負(fù)擔(dān)。在曾廣泛使用的抗瘧藥——氯喹對(duì)抗藥性惡性瘧失去其治療效果后，這一問題更加嚴(yán)重。盡管氯喹抗性產(chǎn)生的具體機(jī)制還不十分清楚，但已有研究表明三種食物泡膜蛋白——Pgh1蛋白、一個(gè)約330kDa的蛋白以及PfCRT蛋白——可能在氯

2、喹抗性產(chǎn)生的過程中發(fā)揮重要作用；而它們的編碼基因——pfmdr1基因,cg2基因和pfcrt基因已被成功克隆，并且測定了序列。此外，一些研究認(rèn)為具有不同基因型的惡性瘧原蟲可能具有不同的致病性、抗原性及藥物敏感性，而且，某些分子標(biāo)記在瘧疾分子流行病學(xué)研究上具有重要價(jià)值。本論文主要包含兩個(gè)方面：一是惡性瘧原蟲海南株氯喹抗性相關(guān)基因的多態(tài)性分析，二是對(duì)惡性瘧原蟲海南株裂殖子表面蛋白3進(jìn)行等位基因分型。 研究目的 了解海南省惡性

3、瘧原蟲pfcrt基因和pfmdr1基因特定位點(diǎn)的多態(tài)性，進(jìn)一步分析其多態(tài)性同氯喹抗性的關(guān)系；對(duì)惡性瘧原蟲海南株進(jìn)行msp3等位基因分型，了解海南省惡性瘧原蟲種群的構(gòu)成特征。 研究方法 用WHO推薦的體外微量法測定海南省惡性瘧原蟲蟲株對(duì)氯喹的敏感性。 根據(jù)Genbank公布的惡性瘧原蟲pfcrt基因和pfmdr1基因序列設(shè)計(jì)引物，采用套式PCR分別擴(kuò)增pfcrt基因編碼第76位和第356位氨基酸的基因片段以及pfm

4、dr1基因編碼第86位、第1042位和第1246位氨基酸的基因片段。PCR產(chǎn)物分別用特定的限制性內(nèi)切酶消化，分析其是否發(fā)生特定的點(diǎn)突變，并分析這些突變同氯喹抗性的關(guān)系。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析抗性基因多態(tài)性同氯喹抗性的相關(guān)性。 設(shè)計(jì)針對(duì)msp3基因兩種不同等位基因型的特異引物，采用套式PCR方法分別擴(kuò)增msp3基因不同等位基因型的目的基因片段。 研究結(jié)果 42份采自海南省瘧疾流行區(qū)惡性瘧病人血樣，經(jīng)體外藥物敏感性測試，22個(gè)為

5、氯喹抗性株，20個(gè)為氯喹敏感性，總抗性率為52.38％。 Pfmdr1基因：在全部42個(gè)樣本中，第86位點(diǎn)均為野生型，沒有發(fā)生突變。42個(gè)樣本中有8個(gè)發(fā)生了D1246Y突變，其中除一例混合感染為氯喹敏感株外，其余均為抗性株。在對(duì)pfmdr1基因第1042位點(diǎn)的檢測中有37個(gè)樣本擴(kuò)增得到目的基因片段，有10個(gè)發(fā)生了N1042D突變，其中9個(gè)為氯喹抗性株，1個(gè)為敏感株。 Pfcrt基因：42個(gè)受試樣本中，有30個(gè)(其中2個(gè)為

6、混合感染)發(fā)生了K76T突變，其中18個(gè)為氯喹抗性株，12個(gè)為氯喹敏感株。第356位點(diǎn)未檢測到突變，均為野生型。 Msp3基因：42個(gè)樣本中有36個(gè)擴(kuò)增得到目的基因片段，屬K1等位基因型的有25個(gè) (52.08％)，屬3D7等位基因型有23個(gè)(47.92％)，其中同時(shí)擴(kuò)增出兩種等位基因片段的有12個(gè)，混合感染率為33.33％。 結(jié)論 海南省惡性瘧原蟲蟲株pfcrt基因的K76T位點(diǎn)突變以及pfmdr1基因的N1