云南瑞麗邊境地區(qū)惡性瘧原蟲(chóng)pfcrt基因72、74、75、76位點(diǎn)突變與氯喹抗性的研究.pdf

1、目的：為探明云南省德宏瑞麗邊境地區(qū)惡性瘧原蟲(chóng)氯喹抗性基因pfcrt的72、73、74、75、76位點(diǎn)氨基酸突變特征，擬對(duì)被公認(rèn)的假定氯喹抗性基因突變核心區(qū)進(jìn)行分子生物學(xué)研究，探討現(xiàn)場(chǎng)惡性瘧原蟲(chóng)對(duì)氯喹抗性表現(xiàn)型與基因型的關(guān)系。以便發(fā)展惡性瘧源蟲(chóng)抗藥性檢測(cè)新方法奠定基礎(chǔ)。 方法：本實(shí)驗(yàn)收集惡性瘧原蟲(chóng)感染患者的全血凍存樣本36例。選符合要求的28例進(jìn)行體外敏感性測(cè)定，采用CheleXR100煮沸法，提取惡性瘧原蟲(chóng)基因組DNA。應(yīng)用巢式

2、PCR方法擴(kuò)增目的片段并直接測(cè)序。分析pfcrt基因72～76位點(diǎn)的DNA序列和氨基酸序列。 結(jié)果：（1）28例惡性瘧原蟲(chóng)感染患者，經(jīng)體外測(cè)定，按瘧原蟲(chóng)能在≥8 pmo l/#中發(fā)育至裂殖體為對(duì)該藥有抗性，反之為敏感。28例樣本顯示抗性，抗性率100%。（2）經(jīng)巢式PCR擴(kuò)增后直接測(cè)序分析，云南瑞麗邊境地區(qū)惡性瘧原蟲(chóng)氯喹抗性突變型真實(shí)存在，呈CVIET單體型。且抗性基因突變型與這一地區(qū)的氯喹抗性表現(xiàn)型完全一致。（3）pfcrt基

3、因的C72S、M741、N75E、K76T位點(diǎn)氨基酸突變呈CVIET單體型，且與東南亞和非洲的一致。 結(jié)論：（1）云南省瑞麗惡性瘧原蟲(chóng)氯喹抗性真實(shí)存在，基因pfcrt內(nèi)已知可能與氯喹抗性有關(guān)的基因位點(diǎn)突變型呈CVIET單體型；（2）惡性瘧原蟲(chóng)pfcrt基因的72、74、75、76氨基酸編碼的突變型與氯喹抗性表現(xiàn)型完全一致；（3）初步認(rèn)為云南瑞麗惡性瘧原蟲(chóng)pfcrt基因的K76T位點(diǎn)氨基酸突變可作為氯喹抗性的分子生物學(xué)基因標(biāo)志。本