包埋玻璃化法超低溫保存條斑紫菜O3D自由絲狀體的研究.pdf

1、本文采用包埋-玻璃化法超低溫保存條斑紫菜自由絲狀體。將1.5g/10mL(鮮重)材料包埋于含30﹪的NaCl的3﹪的褐藻酸鈣膠球中，在暗處恢復(fù)培養(yǎng)1d后用植物玻璃化溶液(plantvitrificationsolution，PVS)(5﹪(v/v)二甲基亞砜+30﹪(v/v)甘油+15﹪(v/v)乙二醇+0.4mol/L蔗糖溶液)在不同的條件下處理不同的時(shí)間。根據(jù)膠球內(nèi)葉綠素的含量計(jì)算存活率。本文主要研究了PVS處理時(shí)間，裝載條件，處理

2、溫度等因素對(duì)存活率的影響，以及在脫水過程和冰凍前后丙二醛(malondialdehyde，MDA)含量以及超氧化物歧化酶(superoxidedismutas，SOD)活性的變化。結(jié)果如下： 1PVS處理時(shí)間對(duì)存活率的影響將30個(gè)膠球放入100﹪的PVS溶液中在4℃下分別處理(min)0，2，5，10，20。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在PVS處理5min后凍存的材料存活率最高為28.1﹪。 2.裝載時(shí)間對(duì)條斑紫菜冰凍存活率的影響在用10

3、0﹪PVS脫水處理之前，用25﹪的PVS溶液對(duì)條斑紫菜絲狀體在4℃下進(jìn)行裝載處理(min)0，2，5，10，20，結(jié)果顯示，最佳裝載時(shí)間為10min，經(jīng)此過程冰凍后的材料的存活率由未經(jīng)裝載的28.7﹪提高到了42.3﹪。 3處理?xiàng)l件對(duì)條斑紫菜冰凍后存活率的影響在0℃條件下處理，條斑紫菜自由絲狀體冰凍之后存活率從36.4﹪(25℃)增加到47.9﹪，提高了10個(gè)百分點(diǎn)。 4化凍條件對(duì)條斑紫菜冰凍存活率的影響研究發(fā)現(xiàn)：在40

4、℃的化凍溫度下，條斑紫菜絲狀體的存活率顯著高于0℃-20℃下的存活率，為41.9﹪。但是化凍溫度超過40℃以后，雖然進(jìn)一步提高了化凍速率，但存活率卻有所下降。 5脫水和冰凍過程中MDA含量的變化冰凍后材料的MDA含量均高于未冰凍材料的MDA含量，同時(shí)經(jīng)過裝載處理的材料冰凍后的MDA含量低于未經(jīng)裝載的材料冰凍后的MDA含量，說明裝載過程可以減少冰凍過程中對(duì)膜的傷害。 6脫水和冰凍過程中SOD活性的變化冰凍后材料的SOD活性