Myosin X在腫瘤侵襲性生長中作用的研究.pdf

1、絲狀偽足是細胞前導緣形成的富含肌動蛋白的指狀突起，在游走性細胞移動中起主要作用。絲足延長和數量的增多是細胞定向遷移能力增強的表現。非傳統(tǒng)肌球蛋白X(Myosin X，Myo X)是細胞內重要的分子馬達，調節(jié)細胞絲足的形成，并維持其穩(wěn)定性。
　　實驗室前期工作通過Real-time PCR和Western Blot分別從分子和蛋白水平檢測了Myo X在乳腺癌細胞系中的表達。在轉移能力強的MDA-MB-231細胞中Myo X高表達;在

2、轉移能力弱的MCF-7細胞中低表達。提示Myo X可能與腫瘤的侵襲能力相關。采用FITC-明膠降解實驗，發(fā)現Myo X在MDA-MB-231細胞降解的細胞外基質處有分布，說明Myo X可能通過形成偽足而參與細胞外基質的降解。用慢病毒載體攜帶Myo X shRNA侵染MDA-MB-231，沉默內源性MyoX的表達。Matrigel侵襲實驗結果表明，沉默了Myo X之后，細胞侵襲能力減弱。
　　本研究利用慢病毒侵染的MDA-MB-23

3、1細胞建立荷瘤鼠模型，進一步探討Myo X對腫瘤侵襲性生長和轉移的影響將Scramble shRNA和Myo X shRNA細胞以1.5×106個/只分別接種到裸鼠乳腺脂肪墊(n=5)，細胞接種16天后，接種部位有結節(jié)狀突起，分別測量小鼠形成的腫瘤的長徑(L)和短徑(W)并計算腫瘤體積，Scramble shRNA組形成的腫瘤體積為114.66±54.50mm3，Myo XshRNA組形成的腫瘤體積為73.25±38.84mm3。之后隔

4、天測量，4周后處死裸鼠，Scramble shRNA組形成的腫瘤體積為5492.47±1781.23mm3，Myo X shRNA組形成的腫瘤體積為1794.87±786.27mm3，經One-way ANONA統(tǒng)計分析差異具有顯著性。將獲得的腫瘤石蠟切片行Ki-67免疫組化染色，結果表明Myo X shRNA組Ki-67表達明顯減低，與對照組相比具有顯著性差異。上述結果表明，沉默了Myo X后，腫瘤的侵襲性生長受到了影響，這種影響可能