S100A13在人骨肉瘤細胞生長侵襲中的作用及機制研究.pdf

1、目的:探討S100A13在人骨肉瘤細胞生長侵襲中的作用及機制。
　　方法:1.隨機選取骨肉瘤患者18例和正常骨組織18例，應(yīng)用實時熒光定量PCR(qPCR)方法檢測骨肉瘤組織和正常骨組織中S100A13 mRNA的表達情況;Western blot檢測骨肉瘤組織和正常骨組織中S100A13蛋白的表達情況;分析S100A13表達量和骨肉瘤患者臨床分期、預(yù)后的關(guān)系。
　　2.Western blot檢測多種骨肉瘤細胞系和人正常成

2、骨細胞系中S100A13蛋白的表達情況，選取表達最高細胞系進行后續(xù)的實驗;構(gòu)建siRNA慢病毒干擾S100A13基因的表達，檢測慢病毒轉(zhuǎn)染效率及干擾效果;生長曲線實驗及MTT實驗檢測干擾S100A13對骨肉瘤細胞系生長及增殖的影響;劃痕實驗、基質(zhì)膠侵襲實驗檢測干擾S100A13對骨肉瘤細胞系細胞遷移、侵襲能力的影響;活體成像系統(tǒng)連續(xù)觀察干擾S100A13對骨肉瘤細胞系裸鼠成瘤情況的影響。
　　3.Western-blot及ELIS

3、A檢測干擾S100A13后骨肉瘤細胞系合成分泌FGF-1的情況;Western-blot檢測干擾S100A13后對MAPK信號通路激活的影響。
　　結(jié)果:1.骨肉瘤組織中S100A13 mRNA和蛋白的表達較正常骨組織中的表達明顯增高;EnnekingⅡ期患者中S100A13 mRNA的表達量較EnnekingⅠ期患者明顯增高;低表達S100A13的骨肉瘤患者比高表達S100A13的患者具有更長的無病存活期和總存活期。
　　

4、2.S100A13蛋白在骨肉瘤細胞系MG-63、U2-OS、HOS、Saos-2中表達均很強，尤其是在U2-OS細胞系表達最強;而在人正常成骨細胞系中S100A13表達很弱;使用慢病毒感染U2-OS細胞效率高，2條序列的干擾效果都很好;生長曲線、實驗MTT實驗均表明干擾S100A13的表達后，可以抑制U2-OS細胞的生長增殖;劃痕實驗、基質(zhì)膠侵襲實驗表明，干擾S100A13表達組較對照組U2-OS細胞的遷移侵襲能力明顯減弱;裸鼠成瘤結(jié)果

5、顯示比較對照組，干擾組腫瘤生長受到明顯抑制。
　　3.Western-blot及ELISA檢測結(jié)果顯示干擾S100A13蛋白后，U2-OS合成分泌的FGF-1減少;干擾S100A13蛋白表達可以明顯抑制FGF受體的激活，使得磷酸化的成纖維細胞生長因子受體的表達大幅降低，F(xiàn)RS2-raf-MEK-ERK通路中FRS2/P-FRS2、P-c-raf、MEK1/2/P-MEK1/2、Erk1/2/P-Erk1/2蛋白的總蛋白量未發(fā)生顯著