TIM-3在骨肉瘤侵襲轉(zhuǎn)移中的作用及機(jī)制研究.pdf

1、研究背景：
　　骨肉瘤是非造血原發(fā)性惡性骨腫瘤中最常見的類型。盡管骨肉瘤化療研究與應(yīng)用有了重大進(jìn)展，但對(duì)于已發(fā)生轉(zhuǎn)移的患者其療效仍不滿意，預(yù)后仍然較差。因此，研究并明確有效的、可用于診斷和新治療策略的生物標(biāo)志物及分子靶點(diǎn)將對(duì)骨肉瘤臨床診斷和治療具有重要的指導(dǎo)意義。T細(xì)胞免疫球蛋白粘蛋白分子（TIMs）已被證實(shí)參與調(diào)節(jié)腫瘤的演進(jìn)，研究表明TIMs在上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）發(fā)展過程中扮演著重要的角色，而EMT已被公認(rèn)是腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移的一

2、個(gè)重要機(jī)制。目前，TIMs在最常見和預(yù)后差的原發(fā)性骨惡性腫瘤-骨肉瘤中的分布和表達(dá)意義尚不清楚，亟待深入研究。
　　目的：
　　探討TIMs在骨肉瘤組織中的表達(dá)及其與骨肉瘤患者生存期之間的關(guān)系，應(yīng)用雙重免疫熒光染色和Western blot檢測方法闡明TIMs和EMT分子標(biāo)志物之間的關(guān)聯(lián)性。同時(shí)，通過體外分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)闡明TIM-3在骨肉瘤中促癌作用以及TIM-3在骨肉瘤侵襲轉(zhuǎn)移中的分子調(diào)控機(jī)制。
　　材料與方法：

3、r>　　采用免疫組化方法（IHC）在38例侵襲性人骨肉瘤組織中檢測TIMs（TIM-1，TIM-3和TIM-4）蛋白的表達(dá)，應(yīng)用雙重免疫熒光染色和Western blot方法檢測TIMs與EMT、增殖及巨噬細(xì)胞表型間的表達(dá)關(guān)系。采用Kaplan-Meier法分析TIM-3與骨肉瘤患者生存期（OS）間的關(guān)系。為進(jìn)一步研究其分子機(jī)制，我們建立了TIM-3基因的siRNA和shRNA慢病毒（TIM-3 shTIM-3-Lv）干擾TIM-3在M

4、G-63骨肉瘤細(xì)胞株中的表達(dá)，并采用雙重免疫熒光和Western blot方法檢測TIM-3和巨噬細(xì)胞、增殖和EMT標(biāo)志物在TIM-3(+)和TIM-3(-) MG-63細(xì)胞中的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　免疫組化結(jié)果發(fā)現(xiàn)TIM-3在骨肉瘤組織中主要定位在細(xì)胞漿和細(xì)胞膜，其中有84.2％（32/38）的骨肉瘤病例表現(xiàn)為 TIM-3蛋白陽性。TIM-3高表達(dá)的骨肉瘤患者生存期明顯縮短。此外，Transwell實(shí)驗(yàn)顯示MG-63骨肉

5、瘤細(xì)胞的侵襲能力在轉(zhuǎn)染si-TIM-3后明顯下降。雙重免疫熒光染色顯示，TIM-3蛋白的表達(dá)在CD68+巨噬細(xì)胞，CD31+內(nèi)皮細(xì)胞，CK-18+上皮細(xì)胞以及PCNA+的腫瘤細(xì)胞中均有表達(dá)。更為有意義的是，在MG-63細(xì)胞中，TIM-3與上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）分子標(biāo)志物，包括Vimentin，Slug，Snail和Smad，有共定位表達(dá)。
　　結(jié)論：
　　TIM-3在骨肉瘤中表達(dá)上調(diào)，其過表達(dá)可以預(yù)示骨肉瘤患者的不良預(yù)后。此