睪丸孤核受體4在肝細(xì)胞性肝癌生長及侵襲轉(zhuǎn)移中的作用.pdf

1、本文從以下幾部分進(jìn)行論述：
　　第一部分 TR4在肝細(xì)胞性肝癌及其癌旁組織中的表達(dá)
　　目的：
　　觀察睪丸孤核受體4(TR4)在肝癌組織及癌旁肝組織中的分布，初步探討TR4在肝細(xì)胞性肝癌發(fā)生中的作用。
　　方法：
　　采用免疫組織化學(xué)的方法，檢測71例臨床肝細(xì)胞性肝癌及其癌旁肝組織標(biāo)本，研究TR4在肝癌及癌旁肝組織細(xì)胞中的分布情況，同時比較兩者TR4分布的差異。
　　結(jié)果：
　　在肝癌組織細(xì)胞

2、漿中，TR4主要呈弱陽性表達(dá)，占總病例數(shù)的64.8％，其次為中等陽性表達(dá)，占總病例數(shù)的35.2％;在肝臟組織細(xì)胞漿中，TR4絕大多數(shù)呈現(xiàn)強(qiáng)陽性及中等陽性表達(dá)，分別占總病例數(shù)的49.2％和42.3％，其次為弱陽性表達(dá)，占總病例數(shù)的8.5％，兩組之間存在顯著性差異(P＜0.01)。在肝癌組織細(xì)胞核中，TR4陽性表達(dá)占絕大多數(shù)（包括弱陽性占52.1％、中等陽性占14.1％、強(qiáng)陽性7.0％），陰性表達(dá)者僅占總病例數(shù)的26.8％;而在肝臟組織細(xì)胞

3、核中，TR4主要為陰性表達(dá)，占總病例數(shù)的73.2％，其次為弱陽性表達(dá)，占總病例數(shù)的26.8％，兩組之間存在顯著性差異(P＜0.01)。
　　結(jié)論：
　　TR4在肝癌組織及肝旁肝組織中存在差異表達(dá)，提示TR4在肝癌的發(fā)生過程中可能起某種調(diào)控作用。
　　第二部分 TR4對肝細(xì)胞性肝癌增殖能力的影響
　　目的：
　　研究TR4對肝細(xì)胞性肝癌增殖能力的影響。
　　方法：
　　運(yùn)用慢病毒載體系統(tǒng)，在肝癌細(xì)

4、胞系HCC-LM3及Huh7中構(gòu)建TR4敲減及過表達(dá)穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系。通過MTS法細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)，分別檢測TR4敲減以及TR4過表達(dá)對細(xì)胞增殖能力的影響。同時，構(gòu)建裸鼠皮下成瘤模型，在動物體內(nèi)研究HCC-LM3細(xì)胞在TR4敲減及過表達(dá)時對腫瘤增殖能力的影響。
　　結(jié)果：
　　運(yùn)用慢病毒載體系統(tǒng)，成功在HCC-LM3及Huh7細(xì)胞中構(gòu)建了TR4敲減及過表達(dá)穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系，并通過Real-time PCR和Western Blot方法進(jìn)行驗(yàn)

5、證。MTS法細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)顯示，TR4敲減或過表達(dá)后對HCC-LM3及Huh7細(xì)胞的增殖能力均無影響。在裸鼠皮下成瘤模型中，將TR4敲減或過表達(dá)的HCC-LM3細(xì)胞與其對照組細(xì)胞接種到裸鼠皮下，觀察42天后，實(shí)驗(yàn)組和對照組裸鼠均成瘤，TR4敲減或過表達(dá)時裸鼠皮下腫瘤的體積與重量與其對照組相比均無明顯差異。
　　結(jié)論：
　　TR4對肝細(xì)胞性肝癌的增殖能力沒有影響。
　　第三部分 TR4對肝細(xì)胞性肝癌侵襲轉(zhuǎn)移能力的影響

6、>　　目的：
　　研究TR4對肝細(xì)胞性肝癌侵襲轉(zhuǎn)移能力的影響。
　　方法：
　　運(yùn)用慢病毒載體系統(tǒng)，在肝癌細(xì)胞系HCC-LM3及Huh7中構(gòu)建TR4敲減以及TR4過表達(dá)穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系。通過細(xì)胞遷移及細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)，分別檢測TR4敲減或過表達(dá)對細(xì)胞遷移/侵襲能力的影響。同時，構(gòu)建熒光素酶標(biāo)記的TR4敲減人肝癌細(xì)胞系LM3-luc-shTR4及其對照組細(xì)胞系LM3-luc-scr，通過外科手術(shù)的方式將上述兩組細(xì)胞分別接種到3只裸

7、鼠肝臟中，通過小動物活體成像系統(tǒng)檢測腫瘤生長及轉(zhuǎn)移情況，在動物體內(nèi)研究TR4對肝癌侵襲轉(zhuǎn)移能力的影響。
　　結(jié)果：
　　運(yùn)用慢病毒載體系統(tǒng)，成功在HCC-LM3及Huh7細(xì)胞中構(gòu)建了TR4敲減及過表達(dá)穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系，并通過Real-time PCR和Western Blot方法進(jìn)行驗(yàn)證。細(xì)胞遷移及細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)顯示，TR4敲減后可促進(jìn)HCC-LM3及Huh7的遷移及侵襲能力，而TR4過表達(dá)后HCC-LM3及Huh7的遷移及侵襲能力