KCTD11在肝細胞性肝癌中的表達及作用機制研究.pdf

1、背景:
　　原發(fā)性肝癌2015年的發(fā)病率處于所有癌癥第六位，病死率高居第四位。經(jīng)過數(shù)十年的努力，我國的原發(fā)性肝癌患者死亡率已有所下降。然而，肝癌患者人數(shù)仍然眾多，有必要繼續(xù)提高我國的肝癌診治技術。肝細胞性肝癌占到了原發(fā)性肝癌中的最大部分，目前肝細胞性肝癌的主要治療方式是以手術為主的綜合治療，但是目前效果仍然不夠理想。近年來興起的分子靶向治療推動了包括乳腺癌和肺癌在內(nèi)的一些惡性腫瘤治療的進步，然而目前肝細胞性肝癌的分子靶向治療仍沒有

2、太大進展。因此，針對肝細胞性肝癌的分子病理特征和治療靶點的研究至關重要。KCTD11在人類成神經(jīng)管細胞瘤中發(fā)揮著抑癌功能，目前還缺少針對KCTD11在肝細胞性肝癌中功能與機制的研究。
　　目的:
　　本研究通過研究KCTD11在肝細胞性肝癌與癌旁組織中的表達差異，分析KCTD11的差異表達與肝癌患者一系列臨床病理特征之間的相關性，并分析KCTD11表達在患者長期預后判斷中的作用，從而驗證KCTD11在肝細胞性肝癌中作為腫瘤分

3、子標記物的潛在價值。本研究還通過一系列細胞功能學實驗與動物實驗來探索KCTD11在肝細胞性肝癌中的作用，并通過表達譜芯片分析潛在的受KCTD11調(diào)控的基因、信號通路與生物學過程，從而明確KCTD11在肝細胞性肝癌形成與發(fā)展中的功能與相應機制。
　　方法:
　　1.通過RT-PCR檢測KCTD11在肝細胞性肝癌的病理組織和對應癌旁組織中mRNA表達水平，采用免疫組化檢測這些標本中KCTD11蛋白質(zhì)的表達水平，比較這兩種組織中K

4、CTD11的表達差異。
　　2.取其中20例肝細胞性肝癌組織以及對應的癌旁組織，檢測其中KCTD11所在染色體位置中雜合性缺失的發(fā)生情況。
　　3.分析51例HCC組織中KCTD11蛋白表達水平與患者臨床病理特征以及長期預后之間的相關性。
　　4.檢測KCTD11在肝癌細胞株以及肝臟正常細胞株QSG-7701中的mRNA以及蛋白質(zhì)表達水平。
　　5.分別在HCCLM3和Huh7細胞株中構建KCTD11外源性過表達

5、和干擾的慢病毒穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞株，通過體外的CCK-8實驗、克隆形成實驗、EDU實驗、周期實驗以及體內(nèi)的動物皮下成瘤實驗，來研究KCTD11在HCC細胞體外增殖與體內(nèi)成瘤中的功能，通過western blot探索KCTD11影響HCC細胞增殖的機制。
　　6.通過表達譜芯片檢測以及后續(xù)的Gene Ontology(GO)分析，探索受KCTD11調(diào)控的基因、信號通路與生物學進程。通過細胞黏附實驗和免疫共沉淀等方法研究KCTD11調(diào)控HC

6、C細胞黏附的功能與機制。
　　7.通過侵襲實驗、遷移實驗和肝臟原位成瘤實驗肺轉(zhuǎn)移模型的構建來研究KCTD11對HCC遷移侵襲能力和遠處轉(zhuǎn)移能力的影響，并通過western blot探索其相應機制。
　　8.通過western blot探索KCTD11在HCC中對Hippo通路的調(diào)控作用以及影響p21表達的多重機制。
　　結果:
　　1.在HCC組織中，KCTD11的mRNA表達與蛋白質(zhì)表達均低于癌旁組織。

7、　　2.KCTD11基因雜合性缺失是引起KCTD11在肝細胞性肝癌中的表達失調(diào)的主要原因之一。
　　3.HCC組織中KCTD11的不同表達水平與患者的腫瘤大小、遠處轉(zhuǎn)移、TNM分期等臨床病理指標無顯著相關性。但是，KCTD11的低表達提示了肝癌患者的不良預后。
　　4.KCTD11在肝癌細胞株中的蛋白表達要低于正常肝細胞，并且在高侵襲性肝癌細胞株中的表達要低于低侵襲性肝癌細胞株。
　　5.KCTD11通過促進p21蛋白

8、的表達來抑制HCC細胞體外增殖與體內(nèi)成瘤。
　　6.KCTD11通過減少CTGF和CLDN1的表達來抑制HCC細胞黏附，CTGF與COL3A1之間存在蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用關系，在HCC中敲低CTGF的表達可促進COL3A1的表達。
　　7.KCTD11通過調(diào)控MMP蛋白和EMT相關蛋白來抑制HCC遷移侵襲能力和遠處轉(zhuǎn)移能力;
　　8.KCTD11在HCC中可激活Hippo通路，并能通過穩(wěn)定p53蛋白表達或激活MST1