補腎法、疏肝法對排卵障礙模型大鼠卵巢氧化損傷及顆粒細胞凋亡的比較研究.pdf

1、目的:以補腎調(diào)經(jīng)方作為補腎法的代表方藥,逍遙丸作為疏肝法的代表方藥。在前期證實補腎法、疏肝法有改善卵巢功能作用的基礎(chǔ)上,比較補腎調(diào)經(jīng)方與逍遙丸對雄激素、雷公藤致排卵障礙模型卵巢氧化損傷和顆粒細胞凋亡影響的異同,探討補腎法、疏肝法恢復卵巢功能的作用機制和作用環(huán)節(jié),以豐富中醫(yī)“腎主生殖”、“女子以肝為先天”理論的實質(zhì)內(nèi)涵,促進中醫(yī)婦科學的發(fā)展。
　　 方法:選用3月齡健康雌性Wistar大鼠204只,體重180～250g。改進鄭家潤

2、,梁文波等造模方法,隨機取170只大鼠雷公藤多甙片70mg/kg/d(給藥劑量為臨床成人用量的20倍),灌胃法給藥,連續(xù)57天。造模組連續(xù)陰道上皮細胞涂片兩個性周期,動情周期轉(zhuǎn)為不規(guī)則,主要為周期不完整及周期延長,提示雷公藤致排卵障礙模型大鼠造模成功。其余34只灌胃給予蒸餾水作為正常對照組。
　　 選用同批出生9日齡健康雌性SD大鼠204只,體重約15g。參照俞瑾等方法,隨機取170只大鼠于頸背部皮下一次性注射丙酸睪丸酮1.25

3、mg/只(0.05ml/只)造模。第22日齡斷奶,自由進食,同樣條件飼養(yǎng)。第70日齡陰道開口,造模組連續(xù)陰道上皮細胞涂片兩個性周期(一個性周期4～5天),陰道上皮細胞持續(xù)角化,提示雄激素致排卵障礙模型大鼠造模成功。其余34只,于頸背部皮下一次性注射中性茶油0.05ml作為正常對照組。
　　 將雷公藤、雄激素致排卵障礙成模大鼠分別隨機分為模型組和治療組,治療組包括:補腎調(diào)經(jīng)方高劑量組、補腎調(diào)經(jīng)方低劑量組、逍遙丸高劑量組、逍遙丸低劑

4、量組,每組各34只；治療組分別灌服補腎調(diào)經(jīng)方與逍遙丸,模型組和正常組灌服蒸餾水,每日1次。灌胃給藥5周,陰道細胞發(fā)生周期性變化時進行陰道細胞涂片兩個性周期(1個性周期4—5天),最后兩天每2小時涂片1次,詳細記錄各組大鼠的動情周期。各組分別選擇動情前期與動情后期斷頭處死,制備血清,進行膽紅素、總抗氧化能力(T-AOC)和丙二醛(MDA)的測定；同時立即無菌操作,在冰盤上取下右側(cè)卵巢,吸去血跡,稱重后置于4％多聚甲醛溶液中固定,常規(guī)石蠟包

5、埋,4μm厚連續(xù)切片,進行免疫組織化學染色,觀察卵巢組織顆粒細胞Caspase-3蛋白的表達；利用TUNEL法和流式細胞術(shù)觀察卵巢顆粒細胞的凋亡；左側(cè)卵巢放入EP管內(nèi),液氮保存,以備卵巢組織勻漿,測定卵巢組織膽紅素、T-AOC和MDA水平。
　　 結(jié)論:(1)補腎調(diào)經(jīng)方、逍遙丸均能改善排卵障礙模型大鼠卵巢的氧化損傷和顆粒細胞凋亡,推測兩方通過此途徑來改善卵巢功能。(2)補腎調(diào)經(jīng)方與逍遙丸在調(diào)節(jié)雷公藤致排卵障礙模型大鼠卵巢氧化損傷