補(bǔ)腎法、疏肝法對(duì)排卵障礙模型大鼠卵巢氧化損傷及顆粒細(xì)胞凋亡的比較研究.pdf

1、目的:以補(bǔ)腎調(diào)經(jīng)方作為補(bǔ)腎法的代表方藥,逍遙丸作為疏肝法的代表方藥。在前期證實(shí)補(bǔ)腎法、疏肝法有改善卵巢功能作用的基礎(chǔ)上,比較補(bǔ)腎調(diào)經(jīng)方與逍遙丸對(duì)雄激素、雷公藤致排卵障礙模型卵巢氧化損傷和顆粒細(xì)胞凋亡影響的異同,探討補(bǔ)腎法、疏肝法恢復(fù)卵巢功能的作用機(jī)制和作用環(huán)節(jié),以豐富中醫(yī)“腎主生殖”、“女子以肝為先天”理論的實(shí)質(zhì)內(nèi)涵,促進(jìn)中醫(yī)婦科學(xué)的發(fā)展。
　　 方法:選用3月齡健康雌性Wistar大鼠204只,體重180～250g。改進(jìn)鄭家潤(rùn)

2、,梁文波等造模方法,隨機(jī)取170只大鼠雷公藤多甙片70mg/kg/d(給藥劑量為臨床成人用量的20倍),灌胃法給藥,連續(xù)57天。造模組連續(xù)陰道上皮細(xì)胞涂片兩個(gè)性周期,動(dòng)情周期轉(zhuǎn)為不規(guī)則,主要為周期不完整及周期延長(zhǎng),提示雷公藤致排卵障礙模型大鼠造模成功。其余34只灌胃給予蒸餾水作為正常對(duì)照組。
　　 選用同批出生9日齡健康雌性SD大鼠204只,體重約15g。參照俞瑾等方法,隨機(jī)取170只大鼠于頸背部皮下一次性注射丙酸睪丸酮1.25

3、mg/只(0.05ml/只)造模。第22日齡斷奶,自由進(jìn)食,同樣條件飼養(yǎng)。第70日齡陰道開(kāi)口,造模組連續(xù)陰道上皮細(xì)胞涂片兩個(gè)性周期(一個(gè)性周期4～5天),陰道上皮細(xì)胞持續(xù)角化,提示雄激素致排卵障礙模型大鼠造模成功。其余34只,于頸背部皮下一次性注射中性茶油0.05ml作為正常對(duì)照組。
　　 將雷公藤、雄激素致排卵障礙成模大鼠分別隨機(jī)分為模型組和治療組,治療組包括:補(bǔ)腎調(diào)經(jīng)方高劑量組、補(bǔ)腎調(diào)經(jīng)方低劑量組、逍遙丸高劑量組、逍遙丸低劑

4、量組,每組各34只；治療組分別灌服補(bǔ)腎調(diào)經(jīng)方與逍遙丸,模型組和正常組灌服蒸餾水,每日1次。灌胃給藥5周,陰道細(xì)胞發(fā)生周期性變化時(shí)進(jìn)行陰道細(xì)胞涂片兩個(gè)性周期(1個(gè)性周期4—5天),最后兩天每2小時(shí)涂片1次,詳細(xì)記錄各組大鼠的動(dòng)情周期。各組分別選擇動(dòng)情前期與動(dòng)情后期斷頭處死,制備血清,進(jìn)行膽紅素、總抗氧化能力(T-AOC)和丙二醛(MDA)的測(cè)定；同時(shí)立即無(wú)菌操作,在冰盤(pán)上取下右側(cè)卵巢,吸去血跡,稱(chēng)重后置于4％多聚甲醛溶液中固定,常規(guī)石蠟包

5、埋,4μm厚連續(xù)切片,進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色,觀察卵巢組織顆粒細(xì)胞Caspase-3蛋白的表達(dá)；利用TUNEL法和流式細(xì)胞術(shù)觀察卵巢顆粒細(xì)胞的凋亡；左側(cè)卵巢放入EP管內(nèi),液氮保存,以備卵巢組織勻漿,測(cè)定卵巢組織膽紅素、T-AOC和MDA水平。
　　 結(jié)論:(1)補(bǔ)腎調(diào)經(jīng)方、逍遙丸均能改善排卵障礙模型大鼠卵巢的氧化損傷和顆粒細(xì)胞凋亡,推測(cè)兩方通過(guò)此途徑來(lái)改善卵巢功能。(2)補(bǔ)腎調(diào)經(jīng)方與逍遙丸在調(diào)節(jié)雷公藤致排卵障礙模型大鼠卵巢氧化損傷