RNA聚合酶Ⅱ轉(zhuǎn)錄的ALU對PKR磷酸化及細胞凋亡的調(diào)節(jié)作用.pdf

1、目的:研究ALU自身的RNA聚合酶Ⅲ啟動子對RNA聚合酶Ⅱ轉(zhuǎn)錄的影響,探討RNA聚合酶Ⅱ轉(zhuǎn)錄ALU的生理功能。
　　 方法:(1)將Alu全基因序列插入pcDNA3.1載體的CMV啟動子的下游,構(gòu)建重組質(zhì)粒pcDNA3.1-ALU；(2)轉(zhuǎn)染293細胞,提取細胞總RNA,RT-PCR篩選穩(wěn)定表達ALU的克??；(3)western-blot法檢測穩(wěn)定表達PCDNA3.1-ALU293細胞PKR的磷酸化水平及與干擾素的關(guān)系。(4)M

2、TT及Cellular DNA Fragmentation ELISA法檢測穩(wěn)定表達PCDNA3.1-ALU293細胞組的增殖抑制與凋亡情況。(5)MTT及Cellular DNA Fragmentation ELISA法檢測瞬時表達PCDNA3.1-ALU293細胞組的增殖抑制與凋亡情況。(6)MTT及Cellular DNA Fragmentation ELISA法檢測瞬時表達PCDNA3.1-ALUHepG2細胞組的增殖抑制與凋亡

3、情況。
　　 結(jié)果:(1)Alu全基因序列插入pcDNA3.1載體的CMV啟動子直接下游能夠被RNA聚合酶Ⅱ有效轉(zhuǎn)錄,說明ALU自身的RNA聚合酶Ⅲ啟動子并不影響RNA聚合酶Ⅱ的轉(zhuǎn)錄。(2)western-blot結(jié)果表明:RNA聚合酶Ⅱ轉(zhuǎn)錄的ALU能夠激活PKR的活性。(3)凋亡結(jié)果表明:RNA聚合酶Ⅱ轉(zhuǎn)錄的ALU以及干擾素處理的細胞組細胞增殖受到抑制,且與對照組相比,更容易發(fā)生凋亡。
　　 結(jié)論:ALU自身的RNA聚