RNA聚合酶Ⅱ轉(zhuǎn)錄的ALU對(duì)細(xì)胞凋亡及HBV復(fù)制的影響.pdf

1、目的：研究由RNA聚合酶Ⅱ轉(zhuǎn)錄的ALU序列對(duì)細(xì)胞凋亡的影響,探討其與干擾素的關(guān)系及對(duì)HBV復(fù)制的影響。
　　 方法：⑴重組質(zhì)粒pcDNA3.1-ALU瞬時(shí)轉(zhuǎn)染人胚腎293細(xì)胞(ALU-293)；四氮唑藍(lán)(MTT)法、Cellular DNA FragmentationELISA檢測(cè)法及細(xì)胞凋亡的DNA梯帶法(DNA Ladder法)檢測(cè)ALU-293,觀察其增殖抑制及凋亡的情況。(3)real time RT-PCR檢測(cè)ALU-

2、293細(xì)胞β干擾素mRNA的表達(dá)水平。⑵重組質(zhì)粒pcDNA3.1-ALU瞬時(shí)轉(zhuǎn)染HepG22.215細(xì)胞(ALU-2.215),real timeRT-PCR檢測(cè)ALU-2.215細(xì)胞ALU表達(dá)水平,ELASA法檢測(cè)ALU-2.215細(xì)胞上清HBsAg及HBeAg；real time PCR檢測(cè)ALU-2.215細(xì)胞上清HBV-DNA及ALU.2-215細(xì)胞HBV-cccDNA水平。
　　 結(jié)果：①M(fèi)TT法顯示瞬時(shí)轉(zhuǎn)染重組質(zhì)粒p

3、cDNA3.1-ALU能夠抑制293細(xì)胞增殖,Cellular DNA Fragmentation ELISA法檢測(cè)顯示ALU-293發(fā)生凋亡,其凋亡與陰性對(duì)照存在顯著差異。瓊脂糖凝膠電泳可見(jiàn)陰性對(duì)照DNA雙鏈完整,未發(fā)生凋亡,ALU-293出現(xiàn)云梯狀的細(xì)胞凋亡DNA ladder,real-time RT-PCR檢測(cè)顯示ALU-293β干擾素mRNA的相對(duì)表達(dá)水平增加。②real time RT-PCR檢測(cè)顯示轉(zhuǎn)染了ALU的2.215

4、細(xì)胞中ALU表達(dá)水平明顯增加。ELISA法檢測(cè)顯示ALU.2-215細(xì)胞上清HBsAg及HBeAg降低,與陰性對(duì)照組pcDNA3.1-2.215有明顯差異(P＜0.05)。Real time PCR檢測(cè)顯示ALU.2-215細(xì)胞上清HBV-DNA的拷貝數(shù)低于陰性對(duì)照pcDNA3.1-2.215,統(tǒng)計(jì)學(xué)有顯著差異(P＜0.05),轉(zhuǎn)染的ALU-2.215與干擾素+2.215 HBV-cccDNA表達(dá)水平下調(diào),陰性對(duì)照pcDNA3.1-2.