版權說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內容提供方,若內容存在侵權,請進行舉報或認領
文檔簡介
1、授予單位代碼:學號或申請?zhí)?10459200612026071010002文學論大位州學鄭士碩(科學學位)食管癌細胞EC一IDNA聚合酶p啟動子堿基突變對其轉錄活性的影響院系名稱:基礎醫(yī)學院學位類別:醫(yī)學專業(yè)名稱:生物化學與分子生物作者姓名:王歡導師姓名、職稱:李月白教授二零零九年五月鄭州大學2009屆碩士學位論文食管癌細胞硯一IDNA聚合酶p啟動子堿基突變對姿軍最活性的影響p啟動子報告基因載體、突變型DNApolp啟動子報告基因載體在
2、腫瘤細胞(EC一1和Eca9706細胞)和正常永生化細胞中啟動子活性強弱,以此探討食管癌細胞株EC一1中DNApolp啟動子的突變形式對其啟動子轉錄活性的影響,以證實腫瘤細胞中是否具有促進DNApolp啟動子活性增加的作用因素。材料與方法1.提取食管癌細胞株EC一1和永生化細胞293T細胞基因組ONA:按照AXYGEN質粒小量提取試劑盒的操作規(guī)程提取2種細胞基因組DNA。2.擴增食管癌細胞株EC一1和293丁細胞DNAPop基因啟動子片
3、段并確定突變位點:設計擴增polp基因啟動子引物,PCR擴增食管癌細胞株EC一1和293T細胞polp基因核心啟動子片段,與pGEM一TEasy質粒連接,然后轉化感受態(tài)細菌筋子~sa,通過?;パa實驗以及采用通用引物T7SP6行PCR以鑒定重組子pGEM一T一p。lppromoter是否轉入。正反雙向測序后,采用DNASIS、OM工GA軟件將測序結果與GenBank查到DNApolp啟動子序列進行同源性比較,分析確定食管癌細胞株EC一1和
4、293T細胞是野生型或突變型polp啟動子并確定突變位點。3.構建含食管癌細胞株〔C一1和永生化細胞293T細胞pep基因啟動子的熒光素酶報告基因載體并鑒定:將已提取并測序正確的重組T載體(pGEM一T一polppromoter)和熒光素酶報告基因載體poL3一neo一enhaneer,用腸01和去刀刀djl分別做雙酶切,回收純化的雙粘Polp啟動子目的片段,亞克隆至雙粘線性PGL3一neo一enhancer熒光素酶報告基因載體,得到重
5、組質粒pGL3一neo一polpPromoter。質粒pGL3一neo一polppromoter經(jīng)乃01和Hl’nd111雙酶切和PCR鑒定后,正反雙向測序以鑒定構建的含食管癌細胞株EC一1和永生化293T細胞polp基因啟動子的熒光素酶報告基因表達載體的正確性,并確認突變存在位點仍然正確。即構建成分別含永生化293T細胞和食管癌細胞株EC一IPolp基因啟動子的熒光素酶報告基因表達載體(pGL3一neo一293TpolpPromote
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權益所有人同意不得將文件中的內容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內容負責。
- 6. 下載文件中如有侵權或不適當內容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 人食管癌組織DNA聚合酶β基因啟動子突變的研究.pdf
- 食管癌組織中DAN聚合酶β啟動子突變的初步研究.pdf
- RNAi沉默食管癌EC9706細胞DNA聚合酶β表達的初步研究.pdf
- DNA聚合酶β、GST-π基因表達的調控對食管癌細胞耐藥性的作用.pdf
- 人類RNA聚合酶Ⅱ啟動子識別研究.pdf
- 玉米RNA聚合酶Ⅲ識別的啟動子活性鑒定與Waxy1基因編輯.pdf
- 家蠶二分濃核病毒DNA聚合酶啟動子P97的相關研究.pdf
- 沉默SP1表達對胃癌細胞PIWIL1表達及其啟動子活性的影響.pdf
- 人DNA聚合酶kappa的轉錄調控研究.pdf
- 五個突變位點對大片段Taq DNA聚合酶聚合功能影響的研究.pdf
- 人表皮細胞β1整合素啟動子活性分析和鈣對β1整合素啟動子活性及表達影響的研究.pdf
- 黑腹果蠅miRNA轉錄因子結合位點的定點突變及其對啟動子活性的影響.pdf
- 反義肽核酸封閉線粒體DNA轉錄啟動子對肺癌細胞-肺癌干細胞生物學特性影響的初步研究.pdf
- DNA聚合酶κ和DNA聚合酶η在烷化劑MNNG引起的非定標突變中的作用.pdf
- 食管癌細胞中fascin基因啟動子區(qū)的克隆與初步鑒定
- 31648.利用熒光共振能量轉移研究dna聚合酶作用機理及dna單堿基突變分析
- hTERT啟動子核心序列的克隆及其在端粒酶陽性肺癌細胞中的靶向轉錄活性研究.pdf
- RNA聚合酶Ⅱ轉錄的ALU對細胞凋亡及HBV復制的影響.pdf
- TGF-β1對UGBP啟動子活性的影響及核心啟動子區(qū)域的篩選.pdf
- 沒食子酸對人食管癌細胞生長與凋亡的影響.pdf
評論
0/150
提交評論