CREB-1對肝星狀細胞TGF-β3表達及其啟動子活性的影響.pdf

1、目的：探討在大鼠肝星狀細胞(HSC)中cAMP反應元件結(jié)合蛋白-1(CREB-1)對轉(zhuǎn)化生長因子-β3(TGF-β3)mRNA表達及其啟動子活性的影響。
　　方法：將HSC分為CREB-1表達質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組(C),siRNA-CREB-1轉(zhuǎn)染組(S),陰性對照質(zhì)粒組(N);Forskolin處理組(F),H-89處理組(H)及空白組(B)。以上各組根據(jù)加或不加入外源性TGF-β3重組蛋白再分為(+)組和(-)組,運用實時熒光定量PCR

2、法檢測TGF-β3mRNA的表達。上述各組共轉(zhuǎn)染PGL3-basic-TGF-β3P(W)或PGL3-basic-TGF-β3P-mCRE(M),以pRL-SV40為空白,熒光素酶報告基因分析法檢測各組TGF-β3啟動子活性。
　　結(jié)果：TGF-β3mRNA表達結(jié)果顯示,S(-)組較N(-)組明顯降低(P=0.021),C(-)組較N(-)組表達有升高趨勢(P=0.082);S(+)組較N(+)組明顯降低(P=0.007),C(+

3、)組較N(+)組表達有升高趨勢(P=0.096)。H(-)組與B(-)組,H(+)組與B(+),N(+)組與N(-)組,S(+)組與S(-)組,B(+)組與B(-)組,H(+)組與H(-)組分別比較,差異具有統(tǒng)計學意義(P值分別為0.011,0.04,0.018,0.025,0.047,0.013)。熒光素酶報告基因分析結(jié)果顯示,S(W)組、N(W)組、C(W)組TGF-β3啟動子活性依次升高(P值分別為0.004,0.019);S(M

4、)組、N(M)組、C(M)組TGF-β3啟動子活性差異無統(tǒng)計學意義(P值分別為0.680,0.935)。H(W)組、B(W)組、F(W)組TGF-β3啟動子活性依次升高(P值分別為0.036,0.012);H(M)組、B(M)組、F(M)組TGF-β3啟動子活性差異無統(tǒng)計學意義(P值分別為0.097,0.592)。 結(jié)論：增加HSC內(nèi)CREB-1表達或提高CREB-1磷酸化水平可上調(diào)TGF-β3mRNA表達及其啟動子活性;CRE