雌二醇代謝產(chǎn)物對(duì)肝星狀細(xì)胞增殖和TGF-β1、CTGF表達(dá)的影響.pdf

1、研究背景：肝纖維化是慢性肝病的共同病理特征，是肝硬化的前期表現(xiàn)，嚴(yán)重威脅著人類的身體健康，目前尚無有效的治療方法。肝纖維化的主要表現(xiàn)為細(xì)胞外基質(zhì)過度沉積，常伴隨著肝星狀細(xì)胞的活化和增殖。轉(zhuǎn)化生長因子-β1(TGF-β1)被認(rèn)為是最強(qiáng)的致纖維化細(xì)胞因子，TGF-β1及其下游信號(hào)分子結(jié)締組織生長因子(CTGF)在調(diào)控肝纖維化的過程中起著重要的作用。 臨床流行病學(xué)資料顯示肝硬化及其并發(fā)癥存在性別差異。在肝纖維化的細(xì)胞模型和動(dòng)物模型也證

2、實(shí)雌激素具有抗肝纖維化的作用。雌激素通常是通過雌激素和雌激素受體(ER)的相互作用發(fā)揮重要的生理功能，過量長期使用也將產(chǎn)生相應(yīng)的副作用。近來有研究證明雌二醇代謝產(chǎn)物具有抑制內(nèi)皮細(xì)胞的增殖和抗氧化作用，具有一定的心、腎保護(hù)作用，推測雌激素抗肝纖維化的作用也有可能是通過代謝產(chǎn)物發(fā)揮的。國內(nèi)外的學(xué)者已經(jīng)證實(shí)，雌二醇代謝產(chǎn)物不能與ER結(jié)合，對(duì)生物體不會(huì)產(chǎn)生雌性化效應(yīng)，故適用于男女性患者，可以避免雌二醇雌性化的副作用，因此在疾病防治方面有其更廣泛

3、的應(yīng)用前景。 研究目的：研究雌二醇代謝產(chǎn)物：2-羥雌二醇(2OHE)、2-甲氧雌二醇(2MeOE)、4-羥雌二醇(40HE)對(duì)人肝星狀細(xì)胞(LX-2)增殖、對(duì)轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)及結(jié)締組織生長因子(CTGF)表達(dá)的影響，進(jìn)一步探討雌二醇代謝產(chǎn)物抗肝纖維化的作用機(jī)制，為雌二醇代謝產(chǎn)物臨床治療肝纖維化提供理論基礎(chǔ)。 研究方法：人肝星狀細(xì)胞(LX-2)隨機(jī)分為13組，分別加入三種不同濃度(10-9M，10-8M，1

4、0-7M)的雌二醇(E2)、雌二醇代謝產(chǎn)物(2OHE，40HE，2MeOE)，并設(shè)陽性對(duì)照組。孵育48h后，檢測以下指標(biāo)：1)MTT法檢測雌二醇及代謝產(chǎn)物對(duì)LX-2增殖的影響；2)采用RT-PCR技術(shù)方法檢測細(xì)胞因子TGF-β1、CTGFmRNA的表達(dá)；3)采用細(xì)胞免疫化學(xué)法檢測細(xì)胞因子TGF-β1、CTGF蛋白的表達(dá)，以明確雌二醇代謝產(chǎn)物抗肝纖維化的作用機(jī)理。 研究結(jié)果： 1)藥物濃度在10-9M～10-7M的作用下，雌二醇代

5、謝產(chǎn)物具有抑制LX-2增殖的作用，并成劑量依賴關(guān)系(P=0.000)；在同一藥物濃度干預(yù)下，雌二醇代謝產(chǎn)物與E2組相比，差別有顯著性(P<0.05)，其中2MeOE組的生物學(xué)活性最強(qiáng)(P<0.01)，但2OHE組和40HE組比較無顯著性差異(P>0.05)。2)藥物濃度在10-9M～10-7M的作用下，雌二醇代謝產(chǎn)物能抑制細(xì)胞因子TGF-β1、CTGFmRNA的表達(dá)，并成劑量依賴關(guān)系(P=0.000)：在同一藥物濃度干預(yù)下，雌二醇代謝產(chǎn)

6、物與E2組相比，差別顯著(P<0.05)，2MeOE組的生物學(xué)活性最強(qiáng)(P<0.05)，但20HE組和40HE組無顯著性差異(P>0.05)。3)藥物濃度在10-7M的作用下，各實(shí)驗(yàn)組的TGFβ1、CTGF的蛋白表達(dá)均下降，2MeOE的生物學(xué)活性最強(qiáng)(P<0.05)，但20HE組和40HE組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 研究結(jié)論： 1)雌二醇代謝產(chǎn)物對(duì)HSCs的增殖具有抑制作用。2)雌二醇代謝產(chǎn)物可以抑制HSCsTGF-β1及其下游信號(hào)C