纈草萜內(nèi)酯對肝星狀細(xì)胞增殖及表達(dá)I型膠原與TGFβ1的影響.pdf

1、【目的】
　　探討纈草萜內(nèi)酯體外對次氮基三醋酸鐵溶液誘導(dǎo)的肝星狀細(xì)胞增殖及表達(dá)I型膠原與TGFβ1的干預(yù)作用。
　　【方法】
　　選對數(shù)增長期細(xì)胞,消化并吹打成細(xì)胞懸液,以1×104個/孔接種于96孔培養(yǎng)板,培養(yǎng)至貼壁后傾去培養(yǎng)基,換含有3％小牛血清的DMEM。采用體外實(shí)驗,將細(xì)胞分為空白對照組、模型組、陽性對照組及纈草萜內(nèi)酯A、B、C組(各有50ug/ml,100ug/ml,200ug/ml,300ug/ml,400

2、ug/ml五個濃度)。除空白對照組之外,其他各組均以0.1mmol/LFeNTA致HSC應(yīng)激,每孔10ul,纈草萜內(nèi)酯組均加入不同濃度的A、B、C三種藥物各10ul,陽性對照組加入秋水仙堿10ul(0.5ug/ml),空白對照組及模型組加入等量生理鹽水,總量100ul/孔。藥物作用36h后,光鏡下觀察細(xì)胞數(shù)量及形態(tài);MTT比色法檢測OD值,計算抑制率。相同操作方法,將細(xì)胞分為空白對照組、模型組、陽性對照組及纈草萜內(nèi)酯C(50ug/ml,

3、100ug/ml,200ug/ml,300ug/ml,400ug/ml)組,藥物作用36h后取細(xì)胞上清,ELISA法檢測I型膠原與TGFβ1的水平。
　　【結(jié)果】
　　1.纈草萜內(nèi)酯A(400ug/ml、300ug/ml及200ug/ml)組的細(xì)胞生長抑制率分別為34.6%、29.3%、19.4%,與模型組比較能顯著抑制體外培養(yǎng)HSC的增殖(P<0.01);B(400ug/ml、300ug/ml、200ug/ml及100ug

4、/ml)組的抑制率分別為44.6%、35.2%、23.4%、13.7%,與模型組比較差異顯著(P<0.01);C(400ug/ml、300ug/ml、200ug/ml、100ug/ml及50ug/ml)組的抑制率分別為51.9%、43.2%、30.1%、20.2%、10%,與模型組相比差異顯著(P<0.01);其它劑量組對比模型組差異不明顯(P>0.05)。A(400ug/ml)組、B(400ug/ml與300ug/ml)組、C(400

5、ug/ml、300ug/ml與200ug/ml)組與陽性對照組比較差異有顯著性(P<0.01),A(300ug/ml)組及B(200ug/ml)與陽性對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),對細(xì)胞抑制作用大于秋水仙堿,余濃度組小于秋水仙堿(P<0.01)。模型組與陽性對照組比較差別顯著(p﹤0.01)。
　　2.纈草萜內(nèi)酯C與HSC相互作用后,400ug/ml及300ug/ml組(I型膠原含量為90.86±7.62ng/L、1

6、19.49±3.32ng/L)與模型組(169.64±12.01ng/L)相比,能顯著抑制I型膠原的表達(dá)量(p﹤0.01),200ug/ml組(138.32±8.05ng/L)也能降低I型膠原的表達(dá)(p﹤0.05),100ug/ml與50ug/ml組與模型組比較差別無意義(p﹥0.05)。與陽性對照組(106.95±4.31ng/L)比較,400ug/ml組明顯高于秋水仙堿(p﹤0.01),300ug/ml組差別無意義(p﹥0.05),

7、200ug/ml、100ug/ml及50ug/ml顯著低于秋水仙堿組(p﹤0.01)。
　　3.纈草萜內(nèi)酯C與HSC相互作用后,400ug/ml及300ug/ml組(TGFβ1含量為119.62±7.27、137.78±4.03pg/ml)與模型組(155.51±5.56pg/ml)相比,能顯著抑制TGFβ1的表達(dá)量(p﹤0.01),200ug/ml組(147.04±3.67pg/ml)也能減少TGFβ1的分泌量(p﹤0.05),

8、100ug/ml與50ug/ml組與模型組比較差別無意義(p﹥0.05)。與陽性對照組(143.88±2.21pg/ml)比較,在TGFβ1抑制程度上,400ug/ml組明顯高于秋水仙堿(p﹤0.01),300ug/ml組差別有意義(p﹤0.05),200ug/ml組差別無意義(p﹥0.05),100ug/ml組(p﹤0.05)及50ug/ml組(p﹤0.01)低于秋水仙堿。
　　【結(jié)論】
　　1.纈草萜酯A、B、C在不同濃

9、度上對肝星狀細(xì)胞增殖有不同的抑制作用,隨藥物濃度增加,藥物對HSC的增殖抑制作用逐漸升高,表現(xiàn)出一定的劑量依賴關(guān)系。50ug/ml時AB藥效相似,其他濃度上,纈草萜酯三種藥物效果C﹥B﹥A。
　　2.纈草萜內(nèi)酯C(400ug/ml、300ug/ml、200ug/ml)可抑制活化的HSC分泌I型膠原。
　　3.纈草萜內(nèi)酯C(400ug/ml、300ug/ml、200ug/ml)可抑制活化的HSC釋放TGFβ1,減弱HSC的分泌