cAMP反應(yīng)序列結(jié)合蛋白-1調(diào)控肝星狀細(xì)胞中TGF-β1、CollagenⅠ的表達(dá).pdf

1、目的：在外源性轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β誘導(dǎo)下探討CREB-1對(duì)大鼠肝星狀細(xì)胞系(HSC-T6)中TGF-β1、CollagenⅠmRNA及蛋白表達(dá)的影響，為抑制TGF-β1誘導(dǎo)的肝纖維化提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：（1）運(yùn)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR（RT-PCR）法及Western印跡法分析外源性TGF-β1誘導(dǎo)HSC-T6不同時(shí)間點(diǎn)TGF-β1、CollagenⅠmRNA及蛋白的表達(dá)；（2）將HSC分為空白質(zhì)粒組（K）、CREB-1表達(dá)質(zhì)粒組（C

2、）；陰性對(duì)照質(zhì)粒組（N）、siRNA-CREB-1組(S），分別轉(zhuǎn)染HSC-T6檢測(cè)CREB-1mRNA的表達(dá)；（3）各質(zhì)粒組分別轉(zhuǎn)染HSC-T6，再根據(jù)加/不加外源性TGF-β1、TGF-β3(10ug/L)分為(+)組和(-)組，通過RT-PCR法及Western印跡法檢測(cè)TGF-β1、CollagenⅠmRNA及蛋白的表達(dá)；（4）外源性TGF-β1、TGF-β3干預(yù)HSC-T68h后Western印跡法檢測(cè)CollagenⅠ蛋白的

3、表達(dá)。
　　結(jié)果：（1）外源性TGF-β1處理HSC-T6后，TGF-β1、CollagenⅠmRNA的表達(dá)于4h后開始升高，隨后其表達(dá)明顯升高（P<0.05），前者于誘導(dǎo)后6h達(dá)峰值（8.50±1.83），后者于誘導(dǎo)后8h達(dá)峰值（22.27±3.00），TGF-β1蛋白表達(dá)與RT-PCR的結(jié)果相一致；（2）C組與K組相比，CREB-1 mRNA的表達(dá)明顯升高，是K組的6.2倍；S組CREB-1mRNA的表達(dá)下降了75％（0.33

4、±0.12，P<0.05）；（3）S組TGF-β1（+）與S組TGF-β1（—）、S組TGF-β1（+）與N組TGF-β1（+）比較TGF-β1、CollagenⅠmRNA及蛋白的表達(dá)均明顯升高（P<0.05）；C組TGF-β1（+）與K組TGF-β1（+）、C組TGF-β3（+）與K組TGF-β3（+）、C組TGF-β1（—）與K組TGF-β1（—）比較TGF-β1、CollagenⅠmRNA及蛋白的表達(dá)均明顯下降（P<0.05）；K

5、組TGF-β3（+）與K組TGF-β3（—）相比較，CollagenⅠmRNA的表達(dá)下降，而TGF-β1mRNA的表達(dá)無明顯變化（P>0.05）；（4）外源性TGF-β1、TGF-β1+TGF-β3誘導(dǎo)HSC-T68h后Collagen1蛋白表達(dá)水平較ctrl組升高（1.81±0.13、1.22±0.13，P<0.05）；外源性TGF-β3誘導(dǎo)HSC-T68h后Collagen1蛋白表達(dá)水平較ctrl組下降（0.45±0.12，P=0.