pRb磷酸化調(diào)控與內(nèi)耳發(fā)育及毛細胞再生.pdf

1、復(fù)旦大學博士論文目錄縮略語簡表??????????????????????????????．．1中文摘要???????????????????????????????一3A B S T R A C T ????????????????????????????????????????．6實驗流程圖??????????????????????????????．．9第一部分阻斷R b —R a f - 1 的相互作用抑制斑馬魚側(cè)線器神經(jīng)丘毛細

2、胞再生???．1 01 ．1 前言??????????????????????????????????????．．1 01 ．2 材料和方法??????????????????????????．．1 11 ．2 ．1 實驗動物?????????????????????????1 11 ．2 ．2 斑馬魚側(cè)線器毛細胞損傷模型????????????????1 21 ．2 ．3 毛細胞的標記( F M l ．4 3 ) ：?????????

3、????????1 21 ．2 ．4 免疫組織化學染色：????????????????????1 21 ．2 ．5 細胞增殖實驗???????????????????????1 31 ．2 ．6 細胞計數(shù)和數(shù)據(jù)分析????????????????????1 31 ．3 結(jié)果????????????????????????????1 31 ．3 ．1 斑馬魚側(cè)線器毛細胞的標記?????????????????1 31 ．3 ．2 新霉素

4、損傷斑馬魚側(cè)線器毛細胞的機制????????????1 41 ．3 ．2 新霉素損傷后神經(jīng)丘中毛細胞再生機制????????????1 41 - 3 ．3R R D ．2 5 1 在斑馬魚側(cè)線器毛細胞再生中的作用????????一1 41 ．4 討論??????????????????????????????????????一1 51 ．5 附圖?????????????????????????????1 71 ．6 參考文獻?????

5、??????????????????????一2 l第二部分雞胚耳囊發(fā)育過程中p R b 的功能調(diào)控及其作用??????????一2 42 ．1 前言??????????????????????????????????????．．2 42 ．2 材料和方法??????????????????????????一2 52 ．2 ．1 實驗動物?????????????????????????2 52 ．2 ．2 雞胚耳囊的分離與培養(yǎng)????

6、???????????????2 52 ．2 ．3 免疫熒光染色???????????????????????2 52 ．2 ．4 細胞增殖實驗???????????????????????2 62 ．2 ．5 熒光染色結(jié)果的觀察、圖像的采集計數(shù)及統(tǒng)計學分析??????2 62 ．2 ．6 耳囊蛋白質(zhì)和m R N A 的提取????????????????．2 72 ．2 ．7q R T —P C R ?????????????????

7、????????????????2 82 ．2 ．8 蛋白印跡?????????????????????????2 92 ．3 結(jié)果?????????????????????????????????????．3 0復(fù)旦大學博士論文R bR a f - 1R b - R a f - lR R D 一2 5 1M e kE r kG lSMl i ph p fd p fB r d UC D KC D N AC 仃D A P Id d H 2

8、 0D M 匣MD N Ad N T PD 1 v rEE BE C LF B SG A P D HG A S縮略語簡表A b b r e v i a t i o n sR e t i n o b l a s t o m ap r o t e i n ，p R bP r o t o —O n c o g e n e P r o t e i n s R a f - 1R b —R a f - li n t e r a c t i o nR

9、 b —R a f - 1d i s r u p t o r 2 5 lM i t o g e n —a c t i v a t e d p r o t e i n k i n a s eE x t r a c e l l u l a r s i g n a l - r e g u l a t e dk i n a s e sG a p p h a s e lS y n t h e s i s p h a s eM i t o t i

10、c p h a s eL a t e r a ll i n ep r i m o r d i u mH o u r s p o s t —f e r t i l i z a t i o nD a y p o s t - f e r t i l i z a t i o n5 - b r o m o - 2 一d e o x y u r i d i n eC y c l i n —d e p e n d e n t k i n a s e

11、sC o m p l e m e n t a r y D N AC o n t r o lg r o u p4 ，6 一d i a m i d i n o 一2 一p h e n y l i n d o l eD o u b l e ．d i s t i l l e d w a t e rE a g l e ’Sm i n i m a l e s s e n t i a l m e d i u mD e o x y r i b o n

12、u c l e i ca c i dD e o x y r i b o n u c l e o t i d eD i t h i o t h r e i t o lE m b r y o n i cE t h i d i u mB r o m i d eE l e c t r o c h e m i l u m i n e s c e n c eF e t a l b o v i n es e r u mG l y c e r a l

13、d e h y d e 3 - p h o s p h a t ed e h y d r o g e n a sG r o w t h a r r e s ts p e c i f i c視網(wǎng)膜母細胞瘤蛋白促癌基因蛋白R a f - 1R b ．R a f - 1 間相互作用R b —R a f - 1 阻斷劑2 5 1絲裂原活化蛋白激酶的激酶細胞外信號調(diào)節(jié)激酶G 1 期S 期M 期側(cè)線器原基受精后小時受精后天5 一溴一2 一脫氧嘧啶核