唑來(lái)膦酸與紫杉醇體外協(xié)同抗腫瘤作用機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、惡性腫瘤系嚴(yán)重危害人民身體健康的常見(jiàn)疾病之一。在男性腫瘤中發(fā)病率較高的肺癌及女性腫瘤中發(fā)病率較高的乳腺癌極易發(fā)生骨轉(zhuǎn)移。骨轉(zhuǎn)移的發(fā)生會(huì)導(dǎo)致骨痛、高鈣血癥、病理性骨折等一系列并發(fā)癥，給患者造成痛苦進(jìn)而嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量。目前，臨床上常用的治療骨轉(zhuǎn)移的方法有放療、藥物治療、介入治療等方法。其中藥物治療中的雙膦酸鹽類藥物是臨床上治療骨轉(zhuǎn)移常用的有效藥物[1]。特別是第3代雙膦酸鹽如唑來(lái)膦酸(Zoledronicacid，ZOL)，在治療骨

2、轉(zhuǎn)移方面取得了極大的成功。最新研究發(fā)現(xiàn)，ZOL在抗骨轉(zhuǎn)移作用的同時(shí)，還具有直接或間接的抗腫瘤作用[2]。如：抑制腫瘤細(xì)胞的粘附和基質(zhì)侵入；抑制腫瘤細(xì)胞的增殖和活力；促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的凋亡；抗血管生成作用；激活免疫功能；協(xié)同其他治療藥物的抗腫瘤活性等。其中，ZOL與細(xì)胞毒藥物協(xié)同抗腫瘤作用機(jī)制的研究最引人注目。如：Neville-Webbe等報(bào)道序貫使用阿霉素和唑來(lái)膦酸能夠增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞凋亡[3]。在眾多的化療藥物中，紫杉醇(Paclitaxe

3、l，PTX)是作用于微管系統(tǒng)的新型抗腫瘤藥，在臨床中是治療乳腺癌和肺癌的一線用藥，它可以促進(jìn)微管的聚合，并使之穩(wěn)定，從而抑制微管網(wǎng)的正常組合，使細(xì)胞阻斷在G2/M期。ZOL與PTX均是乳腺癌與肺癌患者治療中的常用藥物，它們二者聯(lián)合應(yīng)用是否會(huì)發(fā)揮協(xié)同抗腫瘤作用，以及不同的給藥順序是否會(huì)影響聯(lián)合用藥的療效是當(dāng)前國(guó)內(nèi)外討論的熱點(diǎn)。 目的： 本課題擬以通過(guò)觀察ZOL與PTX不同的給藥順序?qū)θ橄侔┘?xì)胞系MCF-7及肺腺癌細(xì)胞系A(chǔ)-

4、549的抑制，通過(guò)分析所獲實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)間的關(guān)系，初步揭示ZOL，與PTX間的相互作用，并明確不同的給藥順序是否會(huì)影響兩藥相互作用的療效，從而為提高臨床腫瘤化療的療效提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。 方法： 以人乳腺癌細(xì)胞系MCF-7及人肺腺癌細(xì)胞系A(chǔ)-549為研究對(duì)象，將其各自分為10組(接受不同濃度的單藥ZOL處理)和5組(接受不同濃度的單藥PTX處理)[4]，計(jì)算各濃度組細(xì)胞的抑制率：結(jié)合國(guó)內(nèi)外實(shí)驗(yàn)用藥濃度及臨床血藥濃度范圍，得出ZOL與

5、PTX在該實(shí)驗(yàn)中的最適用藥濃度，將最適濃度的ZOL與PTX聯(lián)合處理兩系細(xì)胞，處理時(shí)兩系細(xì)胞又按給藥順序分為先給ZOL后給PTX(ZOL→PTX)、先給PTX后給ZOL(PIX→ZOL)及兩藥同時(shí)給藥(PTX+ZOL)三組，并設(shè)立無(wú)藥物處理的對(duì)照組。應(yīng)用MTT方法檢測(cè)各組細(xì)胞抑制率、流式細(xì)胞儀檢測(cè)各組細(xì)胞凋亡率及各組細(xì)胞周期變化，通過(guò)比較分析各組實(shí)驗(yàn)結(jié)果，明確兩藥之間是否有協(xié)同增效的抗腫瘤作用并找到聯(lián)合用藥時(shí)最佳的給藥順序。 結(jié)果

6、： 1.MTT結(jié)果顯示：?jiǎn)嗡嶼OL及單藥PTX對(duì)人乳腺癌細(xì)胞系MCF-7及人肺腺癌細(xì)胞系A(chǔ)-549均有抑制作用；兩藥對(duì)兩系細(xì)胞的抑制作用具有濃度依賴性；結(jié)合國(guó)內(nèi)外實(shí)驗(yàn)用藥濃度及臨床血藥濃度范圍，得出聯(lián)合用藥時(shí)ZOL的實(shí)驗(yàn)濃度為10μM與100μM，PTX的實(shí)驗(yàn)濃度為2nM； 2.MTT結(jié)果顯示：ZOL聯(lián)合PTX對(duì)兩系細(xì)胞的抑制作用強(qiáng)于ZOL、PTX單獨(dú)應(yīng)用對(duì)兩系細(xì)胞的抑制作用，具有協(xié)同增效的作用。兩藥聯(lián)合應(yīng)用時(shí)藥物對(duì)細(xì)胞

7、的抑制作用與給藥順序有關(guān)，抑制率由大到小對(duì)應(yīng)的給藥順序?yàn)椋篜TX→ZOL>PTX+ZOL>ZOL→PTX，各組抑制率具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，P<0.05； 3.流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)各處理組細(xì)胞凋亡結(jié)果示：聯(lián)合給藥時(shí)，PTX→ZOL組的細(xì)胞凋亡率最大，PTX+ZOL組次之，再者為ZOL→PTX組；各聯(lián)合給藥組細(xì)胞的凋亡率均高于ZOL、PTX單藥處理組細(xì)胞的凋亡率，并具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，P<0.05； 4.流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期示：抑制微管解

8、聚的PTX促進(jìn)細(xì)胞阻滯在G2/M期。對(duì)于ZOL，隨著劑量的增加會(huì)引起S期細(xì)胞的增加，G2/M期細(xì)胞的降低，亞G1期細(xì)胞的增加。對(duì)聯(lián)合給藥組細(xì)胞周期的分析，發(fā)現(xiàn)不同的給藥順序組的不同之處是對(duì)S期及G2/M期細(xì)胞的作用。誘導(dǎo)凋亡最明顯的給藥順序組(PTX→ZOIL)是唯一一個(gè)能夠誘導(dǎo)S期細(xì)胞聚集從而將細(xì)胞周期阻滯在S期而不能進(jìn)入G2/M期進(jìn)行細(xì)胞增殖分裂的處理組，其與對(duì)照組有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，P<0.01。 結(jié)論： ZOL、