腦鈉肽對(duì)外周血內(nèi)皮祖細(xì)胞功能與數(shù)量影響的臨床及實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:1、探討冠心病患者外周血內(nèi)皮祖細(xì)胞與腦鈉肽水平的關(guān)系及臨床意義；2、研究腦鈉肽對(duì)外周血內(nèi)皮祖細(xì)胞數(shù)量及增殖、遷移、黏附能力的影響。
　　 方法:1、80例患者經(jīng)冠狀動(dòng)脈造影術(shù)診斷分為三組:穩(wěn)定型心絞痛(SAP)組21例,急性冠脈綜合征(ACS)組36例和對(duì)照組23例。急性冠脈綜合征組包括急性心肌梗死20例和不穩(wěn)定型心絞痛16例,患者入院后采用微粒子酶免分析法(MEIA)檢測(cè)腦鈉肽水平,流式細(xì)胞法檢測(cè)外周血CD133+/KD

2、R+表達(dá)水平；2、選取健康成人30例,入院后取靜脈血20ml,密度梯度離心法外周血分離獲得單個(gè)核細(xì)胞,將其接種在人纖維連接蛋白包被的培養(yǎng)板上,經(jīng)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)誘導(dǎo)培養(yǎng),7天后獲得貼壁細(xì)胞,熒光顯微鏡鑒定FITC-UEA-I和Dil-acLDL雙染色為正在分化的EPCs。收集EPCs隨機(jī)分成6組,分別為對(duì)照組和不同濃度腦鈉肽干預(yù)組(0.05ug/ml、0.10ug/ml、0.15ug/ml、0.20ug/ml、0.25ug/

3、ml),共培養(yǎng)24h后采用MTT比色法測(cè)定EPCs的增殖能力,改良的Boyden小室法測(cè)定EPCs的遷移能力,粘附實(shí)驗(yàn)測(cè)定內(nèi)皮祖細(xì)胞的粘附能力,流式細(xì)胞法測(cè)定培養(yǎng)細(xì)胞的CD133+/KDR+表達(dá)水平。
　　 結(jié)果:1、對(duì)照組、穩(wěn)定型心絞痛組及急性冠脈綜合征組循環(huán)腦鈉肽水平分別為39.37±18.07pg/ml、50.19±21.84pg/ml及384.97±125.82pg/ml,穩(wěn)定型心絞痛組及對(duì)照組腦鈉肽水平均明顯低于ACS

4、組患者(P<0.01),穩(wěn)定型心絞痛組組腦鈉肽與對(duì)照組無(wú)顯著性差異(P>0.05)。對(duì)照組、穩(wěn)定型心絞痛組及急性冠脈綜合征組循環(huán)KDK+/CD133+水平分別為0.53±0.15‰、0.44±0.14‰及0.88±0.27‰,對(duì)照組與穩(wěn)定型心絞痛組患者循環(huán)內(nèi)皮祖細(xì)胞水平均明顯低于急性冠脈綜合征組患者(P<0.01),穩(wěn)定型心絞痛組循環(huán)內(nèi)皮祖細(xì)胞與對(duì)照組無(wú)顯著性差異(P>0.05)。急性冠脈綜合征組內(nèi)皮祖細(xì)胞水平與腦鈉肽水平呈正相關(guān)(r=

5、831,p<0.01)。2、健康成人外周血分離獲得的單個(gè)核細(xì)胞培養(yǎng)7天形成梭形的內(nèi)皮樣細(xì)胞,Dil-acLDL和FITC-UEA-I吞噬實(shí)驗(yàn)上熒光顯微鏡觀察雙染陽(yáng)性細(xì)胞為正在分化的EPC,MTT比色法檢測(cè)示不同濃度的重組人腦鈉肽干預(yù)組均顯著增加EPCs的增殖能力,且呈一定的量效關(guān)系,不同濃度腦鈉肽均明顯提高EPCs的遷移能力,且呈一定的量效關(guān)系,腦鈉肽對(duì)EPCs黏附能力無(wú)明顯影響,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)顯示各濃度腦鈉肽對(duì)內(nèi)皮祖細(xì)胞的占細(xì)胞總數(shù)比