芪紅合劑含藥血清對(duì)人外周血內(nèi)皮祖細(xì)胞數(shù)量、功能和NOS的影響.pdf

1、目的：觀察芪紅合劑含藥血清對(duì)人外周血內(nèi)皮祖細(xì)胞(EPCs)數(shù)量、功能及一氧化氮合酶(NOS)的影響，探討其對(duì)人外周血內(nèi)皮祖細(xì)胞的保護(hù)機(jī)制。
　　 方法：
　　 1、芪紅合劑含藥血清的制備選擇雄性Wistar大鼠12只，隨機(jī)分成4組：芪紅合劑高劑量組、芪紅合劑中劑量組、芪紅合劑低劑量組、空白對(duì)照組，分別以不同劑量芪紅合劑水煎劑和等劑量生理鹽水連續(xù)灌胃7d，心臟采血后提取血清，制備成芪紅合劑含藥血清和空白血清。
　　

2、 2、人外周血EPCs的培養(yǎng)及鑒定將密度梯度離心法分離獲得的人外周血單個(gè)核細(xì)胞接種于人纖維連接蛋白包被的培養(yǎng)瓶，加入M199培養(yǎng)液培養(yǎng)4d，換液，培養(yǎng)至7d，收集貼壁細(xì)胞，激光共聚焦顯微鏡，流式細(xì)胞儀鑒定血管內(nèi)皮祖細(xì)胞(EPCs)。
　　 3、芪紅合劑含藥血清對(duì)EPCs數(shù)量、功能及NOS的影響培養(yǎng)7天后，取貼壁的EPCs，隨機(jī)分為4組：對(duì)照組、芪紅合劑低劑量干預(yù)組、芪紅合劑中劑量干預(yù)組、芪紅合劑高劑量干預(yù)組。用含空白血清及低、中

3、、高劑量芪紅合劑含藥血清的條件培養(yǎng)液分別培養(yǎng)24h、48h、72h后，倒置相差顯微鏡下觀察EPCs生長(zhǎng)情況，分別采用細(xì)胞計(jì)數(shù)法、改良的Boyden小室，硝酸還原酶法和化學(xué)比色法觀察EPCs的數(shù)量，遷移能力，分泌NO的能力及NOS活性。
　　 結(jié)果：
　　 1、EPCs的培養(yǎng)及鑒定分離的單個(gè)核細(xì)胞呈圓形，體積較小，培養(yǎng)4天后，細(xì)胞體積增大，有細(xì)胞集落形成，7天后形成了梭形的內(nèi)皮樣細(xì)胞，并可見(jiàn)線狀結(jié)構(gòu)。經(jīng)激光共聚焦顯微鏡鑒定

4、，Dil-acLDL和FITC-UEA-I雙染色陽(yáng)性細(xì)胞為是正在分化的EPCs，流式細(xì)胞儀見(jiàn)貼壁細(xì)胞表達(dá)CD34陽(yáng)性率(35.65+2.47)％，CD133陽(yáng)性率為(13.13±1.39)％，進(jìn)一步驗(yàn)證為EPCs。
　　 2、芪紅合劑含藥血清對(duì)人外周血EPCs數(shù)量、功能及NOS的影響結(jié)果顯示：與對(duì)照組比較，低、中、高劑量芪紅合劑含藥血清均能顯著增加EPCs的數(shù)量，顯著改善EPCs遷移、分泌NO能力，且增加NOS活性。對(duì)EPCs分

5、泌NO能力及NOS活性影響，24h以高劑量芪紅合劑含藥血清效果明顯，48h、72h時(shí)以中劑量效果顯著。對(duì)EPCs數(shù)量、遷移功能的影響以中劑量明顯(P＜0.05)。并且其影響呈時(shí)間相關(guān)性，芪紅合劑含藥血清對(duì)EPCs的數(shù)量、分泌NO能力、NOS活性影響于作用24h開(kāi)始高于對(duì)照組，于48h達(dá)到高峰(P＜0.05)。對(duì)EPCs遷移功能的影響于作用后24h開(kāi)始高于對(duì)照組，72h達(dá)到高峰(P＜0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1、芪

6、紅合劑含藥血清可以增加人外周血EPCs的數(shù)量、促進(jìn)其遷移能力、分泌NO能力，增加NOS活性。并且芪紅合劑含藥血清對(duì)EPCs的影響有劑量和時(shí)間相關(guān)性，中劑量芪紅合劑含藥血清作用48h效果較佳。
　　 2、芪紅合劑含藥血清能增加NOS活性，促進(jìn)NO分泌，這可能是其增加EPCs數(shù)量，改善EPCs功能的作用基礎(chǔ)。
　　 3、芪紅合劑含藥血清可以增加EPCs的數(shù)量，改善功能，這可能是其防治血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷及內(nèi)皮功能障礙相關(guān)性疾病的