糖尿病視網(wǎng)膜病變對(duì)鼠循環(huán)外周血內(nèi)皮祖細(xì)胞數(shù)量的影響.pdf

1、目的:本實(shí)驗(yàn)旨在建立Wistar大鼠糖尿病模型、糖尿病視網(wǎng)膜病變(DR)模型,分析糖尿病視網(wǎng)膜病變對(duì)循環(huán)外周血的內(nèi)皮祖細(xì)胞(EPCs)的影響。探討內(nèi)皮祖細(xì)胞在糖尿病視網(wǎng)膜病變發(fā)病機(jī)制中的作用,為治療糖尿病視網(wǎng)膜病變開(kāi)拓思路、提供理論依據(jù)。
　　 方法:選取體重250-350g的2月齡雄性成年Wistar大鼠60只隨機(jī)分為正常對(duì)照組,腹腔注射鏈脲佐菌素(STZ)大鼠1周、1、3、6個(gè)月組。1周、1、3、6個(gè)月組按50mg/kg腹腔

2、快速注射2％STZ溶液,對(duì)照組注射等量的枸櫞酸-枸櫞酸鈉緩沖液。進(jìn)行血糖、體重,流式細(xì)胞儀計(jì)數(shù)幾組大鼠循環(huán)外周內(nèi)皮祖細(xì)胞數(shù)量,HE染色,視網(wǎng)膜血管鋪片PAS染色、透射電鏡檢測(cè)并行統(tǒng)計(jì)分析。
　　 結(jié)果:
　　 1.大鼠腹腔注射鏈脲佐菌素72 h后,血糖(空腹血糖大于16.65mmol/L)達(dá)成模標(biāo)準(zhǔn)。成模后1周即出現(xiàn)多飲、多食、多尿等糖尿病癥狀,體質(zhì)量減小。對(duì)照組大鼠每日飲水量少,尿量少,毛色光滑,體質(zhì)量隨周齡增大而穩(wěn)步

3、增長(zhǎng)。腹腔注射STZ后1周、1、3、6個(gè)月組和對(duì)照組大鼠的血糖比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,它們的體重比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　 2.EPCs流式細(xì)胞儀計(jì)數(shù):1周、1個(gè)月、3個(gè)月、6個(gè)月、對(duì)照組循環(huán)血內(nèi)皮祖細(xì)胞計(jì)數(shù)分別為25±7,28±8,39±7,43±7,45±4。與對(duì)照組相比,注射STZ后EPCs計(jì)數(shù)均降低。注射STZ1周、1、3、6個(gè)月組EPCs計(jì)數(shù)逐漸升高。幾組外周血EPCs計(jì)數(shù)比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　 3.HE染色:和正常

4、對(duì)照組相比,一周組和一個(gè)月組的視網(wǎng)膜各層未見(jiàn)明顯變化。在三個(gè)月組中,視網(wǎng)膜各層開(kāi)始較明顯的變薄,排列紊亂,部分血管擴(kuò)張。在六個(gè)月組中,視網(wǎng)膜各層變薄、排列紊亂更加明顯,部分血管擴(kuò)張更加明顯,甚至有向外突出、破潰的趨勢(shì)?？傮w趨勢(shì)是實(shí)驗(yàn)組大鼠視網(wǎng)膜組織較正常對(duì)照組大鼠視網(wǎng)膜組織各層厚度變薄,視細(xì)胞數(shù)目隨月齡增加而逐漸減少。
　　 4.視網(wǎng)膜血管消化鋪片:一周組可見(jiàn)視網(wǎng)膜毛細(xì)血管網(wǎng)管徑粗細(xì)均勻一致,內(nèi)皮細(xì)胞核長(zhǎng)呈橢圓形、染色淡,周細(xì)胞

5、核呈圓形、染色深；大鼠糖尿病3個(gè)月時(shí),視網(wǎng)膜毛細(xì)血管周細(xì)胞核多數(shù)與正常組相似,僅個(gè)別細(xì)胞核體積稍大,染色稍淺,毛細(xì)血管管腔通暢。6個(gè)月時(shí),視網(wǎng)膜毛細(xì)血管常見(jiàn)周細(xì)胞核腫脹,體積增大,染色變淺,毛細(xì)血管可見(jiàn)局灶性多形核白細(xì)胞阻塞管腔,偶見(jiàn)閉鎖的毛細(xì)血管。
　　 5.透射電鏡檢測(cè):一個(gè)月組毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞及周細(xì)胞核膜輕微凹陷,異染色質(zhì)聚集靠邊,管腔未變形；線(xiàn)粒體脊清晰,部分腫脹的線(xiàn)粒體均質(zhì)溶解。3個(gè)月組內(nèi)皮細(xì)胞水腫,核染色質(zhì)聚集、靠邊

6、,管腔變形不顯著；內(nèi)網(wǎng)層細(xì)胞內(nèi)大量空泡,線(xiàn)粒體腫脹,嵴消失,毛細(xì)血管基底膜增厚,電子密度明顯增大。6個(gè)月組內(nèi)皮細(xì)胞腫脹變形,核染色質(zhì)凝聚靠邊,核變形,線(xiàn)粒體明顯腫脹,并見(jiàn)空泡變性；基底膜增厚顯著,電子密度增加；內(nèi)皮細(xì)胞的胞質(zhì)向管腔內(nèi)指狀突起,管腔明顯狹窄,甚至閉塞。節(jié)細(xì)胞層可見(jiàn)節(jié)細(xì)胞胞核凹陷,形成假包環(huán)體,高爾基囊泡擴(kuò)張。
　　 結(jié)論:
　　 1.腹腔注射STZ1周后即可形成穩(wěn)定的糖尿病大鼠模型。
　　 2.腹腔

7、注射STZ后1、3、6個(gè)月組出現(xiàn)DR的改變,且隨月齡增加而逐漸加重。
　　 3.注射STZ后EPCs計(jì)數(shù)均降低。注射STZ1周、1、3、6個(gè)月組EPCs計(jì)數(shù)逐漸升高。
　　 4.推測(cè)EPC在糖尿病視網(wǎng)膜病變發(fā)病機(jī)制中起著非常重要的作用。EPCs動(dòng)員及生存時(shí)間,導(dǎo)致血管的再內(nèi)皮化的過(guò)程受損,促進(jìn)缺血性疾病的發(fā)生發(fā)展,EPCs參與了DR過(guò)程。
　　 5.探討內(nèi)皮祖細(xì)胞在糖尿病視網(wǎng)膜病變發(fā)病機(jī)制中的作用,為治療糖尿病視