系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者外周血內(nèi)皮祖細(xì)胞數(shù)量及分化功能的研究.pdf

1、目的:旨在通過(guò)觀察系統(tǒng)性紅斑狼瘡(systemic lupus erythematosus,SLE)患者外周血內(nèi)皮祖細(xì)胞(endothelial progenitor cells,EPCs)數(shù)量和分化功能的變化,探討其與病情活躍的相關(guān)性及在SLE患者血管炎發(fā)病中的重要作用。
　　 方法:1、根據(jù)1997年美國(guó)風(fēng)濕病學(xué)院修訂的SLE診斷標(biāo)準(zhǔn)及納入標(biāo)準(zhǔn),排除重疊有其他結(jié)締組織疾病者、原發(fā)造血系統(tǒng)疾病患者、慢性腎功衰及尿毒癥患者及近期

2、外科手術(shù)、外傷、炎癥、腫瘤者等影響.EPCs數(shù)量及功能的因素。臨床收集女性SLE患者30例(B組),正常對(duì)照組30例(A組),并根據(jù)系統(tǒng)性紅斑狼瘡疾病活動(dòng)指數(shù)(SLEDAI評(píng)分)對(duì)患者的病情活動(dòng)進(jìn)行評(píng)分。2、無(wú)菌采集兩組受試者外周血各20ml,以肝素抗凝,采用密度梯度離心法分離出外周血單個(gè)核細(xì)胞。3、分離的單個(gè)核細(xì)胞行細(xì)胞培養(yǎng),以倒置相差顯微鏡觀察培養(yǎng)期間細(xì)胞的生長(zhǎng)情況。4、采用FITC標(biāo)記的抗人CD133(FITC-CD133)和PE

3、標(biāo)記的抗人CD34(PE-CD34)或FITC標(biāo)記的抗人 CD133(FITC-CD133)和PerCP／Cy5.5標(biāo)記的抗人VEGFR2(PerCP／Cy5.5-VEGFR2,KDR)標(biāo)記各組細(xì)胞,以熒光顯微鏡鑒定內(nèi)皮祖細(xì)胞。5、剛分離的兩組外周血單個(gè)核細(xì)胞,分別采用FITC-CD133和PE-CD34或FITC-CD133和PerCP／Cy5.5-VEGFR2標(biāo)記細(xì)胞,以流式細(xì)胞儀檢測(cè)雙陽(yáng)性細(xì)胞率,即EPCs數(shù)量。6、細(xì)胞培養(yǎng)七天后

4、,分別以PE標(biāo)記的抗人CD14(PE-CD14)、FITC標(biāo)記的抗人CD64(FITC-CD64)、PerCP／Cy5.5-VEGFR2,采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)陽(yáng)性細(xì)胞率,進(jìn)而比較分化功能。7、所有結(jié)果均用SPSS16.0軟件統(tǒng)計(jì)分析。
　　 結(jié)果:1、細(xì)胞培養(yǎng):新鮮分離的單個(gè)核細(xì)胞呈圓形,體積較小,懸浮于培養(yǎng)液中。48小時(shí)后貼壁,貼壁細(xì)胞體積逐漸增大。培養(yǎng)至4—5天時(shí)細(xì)胞增殖明顯,部分細(xì)胞形成集落,中心為圓形細(xì)胞,周?chē)L(zhǎng)梭形細(xì)胞放

5、射狀排列；培養(yǎng)至7天,梭形細(xì)胞增多,呈網(wǎng)格樣生長(zhǎng)或線形生長(zhǎng)。2.以熒光顯微鏡鑒定,PE-CD34和FITC-CD133表達(dá)雙陽(yáng)性或PerCP／Cy5.5-VEGFR2和FITC-CD133表達(dá)雙陽(yáng)性顯示桔黃色熒光,即為正在分化的EPCs。3、與正常對(duì)照組的外周血EPCs陽(yáng)性率(0.5107±0.2185％)相比較,SLE患者外周血中EPCs陽(yáng)性率(0.1019±0.05706％)明顯降低(p<0.01)。4、外周血單個(gè)核細(xì)胞培養(yǎng)七天后表

6、達(dá)單核細(xì)胞表面標(biāo)志CD14+、CD64+細(xì)胞百分率與正常對(duì)照組比較明顯增加(16.4867±2.4061％vs9.8200±1.9978％,p<0.001)、(16.0400±1.6139％vs10.8857±2.0680％,p<0.001),而內(nèi)皮細(xì)胞表面標(biāo)記KDR+細(xì)胞百分率在正常對(duì)照組(74.8080±3.2000％)明顯的高于SLE患者(65.3950±4.7513％)(p<0.001),即SLE患者外周血EPCs分化功能減低。

7、5.行Pearson相關(guān)分析顯示EPCs的數(shù)量與SLE患者的病情活躍程度呈明顯的負(fù)相關(guān)(R=-0.692,P<0.001)。CD14+、CD64+細(xì)胞百分率與SLE患者的病情活躍程度呈明顯正相關(guān)(R=0.920,P<0.001;R=0.617,P<0.001),KDR+細(xì)胞百分率與SLE患者的病情活躍程度呈明顯負(fù)相關(guān)(R=-0.797,P<0.001),即SLE患者外周血EPCs分化功能與病情活躍程度呈明顯負(fù)相關(guān)。
　　 結(jié)論: