實(shí)驗(yàn)性大鼠腦梗死后腦水腫和梗死周圍COX-2表達(dá)的動(dòng)態(tài)觀察.pdf

1、目的：腦梗死(cerebralinfarction)是臨床常見病和多發(fā)病，具有發(fā)病率、致殘率和病死率高的特點(diǎn)，嚴(yán)重影響著患者的預(yù)期壽命和生活質(zhì)量。近幾十年來對(duì)腦梗死進(jìn)行了大量的研究，急性腦梗死的預(yù)后比較差。由于腦梗死損傷的機(jī)制十分復(fù)雜，缺乏有效的干預(yù)手段。目前認(rèn)為參與腦梗死損傷的分子機(jī)制有以下幾個(gè)方面：能量代謝障礙、細(xì)胞內(nèi)鈣超載、細(xì)胞凋亡、興奮性氨基酸及自由基的毒性作用和一氧化氮介導(dǎo)的神經(jīng)損傷等共同參與腦梗死腦損傷的病理生理過程。近年來

2、許多研究認(rèn)為COX-2(cyclooxygenase-2)與后者密切相關(guān)。腦梗死后腦組織的繼發(fā)性損傷是導(dǎo)致神經(jīng)功能惡化的主要原因，其中梗死后腦水腫是其中重要的病理變化之一。COX-2是催化花生四烯酸生成PGs和TXA2的關(guān)鍵酶，在急性腦梗死后繼發(fā)神經(jīng)元損傷和腦水腫形成過程中可能起著重要作用。本研究的目的在于建立穩(wěn)定的大鼠腦梗死的動(dòng)物模型，在此基礎(chǔ)上進(jìn)行行為學(xué)評(píng)分，測(cè)定腦梗死后腦組織含水量的變化規(guī)律，觀察COX-2在腦組織中的細(xì)胞定位和動(dòng)

3、態(tài)表達(dá)，進(jìn)而探討COX-2在腦梗死后腦組織損傷中的作用和意義。 方法：參照Longa等的線栓法制作大鼠右側(cè)大腦中動(dòng)脈閉塞的動(dòng)物模型。假手術(shù)對(duì)照組不插線。在腦梗死后6h、24h、48h、72h、7d對(duì)大鼠進(jìn)行行為學(xué)評(píng)分，包括Longa評(píng)分法(LongaScore)、肢體對(duì)稱試驗(yàn)評(píng)分法(FootfaultAsymmetryScore)、Berderson評(píng)分法(BerdersonScore)、平衡木評(píng)分法(BalanceBeamSc

4、ore)。然后將動(dòng)物斷頭處死，取出完整的腦組織，可見右側(cè)腦組織明顯水腫，去處嗅球及額葉前部4mm腦組織，取剩余腦組織額極前部2mm用來測(cè)量病變同側(cè)和對(duì)側(cè)腦含水量，后部腦組織用4％多聚甲醛固定，將腦組織切成4mm厚薄片，用做蘇木精-伊紅染色和免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)。用干濕重法測(cè)相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)的腦組織含水量。常規(guī)蘇木精-伊紅染色觀察大鼠腦組織的病理改變，觀察梗死周圍的水腫帶、炎性細(xì)胞浸潤(rùn)等病理改變。采用免疫組化方法觀察腦梗死后不同時(shí)間大鼠腦組織表

5、達(dá)COX-2的情況。 結(jié)果：①腦梗死后大鼠出現(xiàn)不同程度的左側(cè)肢體偏癱，所有大鼠術(shù)后6h各種評(píng)分都很高，與對(duì)照組相比無顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，考慮為麻醉藥品和手術(shù)創(chuàng)傷所致。假手術(shù)組大鼠在24h左右恢復(fù)正常。腦梗死后24h行為學(xué)評(píng)分逐漸增高，至48h達(dá)高峰，72h行為學(xué)異常開始好轉(zhuǎn)，7d左右基本恢復(fù)正常，提示行為學(xué)異常與腦損害程度一致。②腦梗死后6h手術(shù)側(cè)腦組織含水量開始升高，24h腦梗死組手術(shù)側(cè)腦含水量明顯升高(80.69±2.65)％，

6、48h～72h達(dá)到高峰，分別為(82.07±1.85)％和(80.20±1.42)％，梗死后48h與假手術(shù)對(duì)照組和病變對(duì)側(cè)相比均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜0.05。7d后明顯降低，為(78.28±0.33)％。③假手術(shù)組及腦梗死組手術(shù)對(duì)側(cè)腦組織均很少炎細(xì)胞浸潤(rùn)。腦梗死后6h病變周圍少量炎細(xì)胞浸潤(rùn)，梗死后24h梗死周圍及炎細(xì)胞浸潤(rùn)開始增多，48h可以見到大量以中性粒細(xì)胞為主的炎性細(xì)胞，72h時(shí)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)仍很多，但不如48h明顯，以后逐漸減少，7

7、d時(shí)基本消失，病變周圍出現(xiàn)膠質(zhì)細(xì)胞和毛細(xì)血管增生。④COX-2陽性著色細(xì)胞可見于額葉、頂葉皮質(zhì)神經(jīng)元，海馬和部分血管內(nèi)皮細(xì)胞。假手術(shù)組大鼠兩側(cè)腦組織均有微量COX-2表達(dá)。大鼠腦梗死后6h后，與對(duì)側(cè)比較，梗死周圍COX-2陽性細(xì)胞數(shù)開始增加，分別為17.00±2.24和5.00±1.22。然后隨著時(shí)間的推移，梗死周圍的陽性細(xì)胞越來越多，至24h達(dá)到高峰，達(dá)39.40±4.39，而手術(shù)對(duì)側(cè)僅為5.80±1.30，到7d時(shí)明顯減少。病變對(duì)側(cè)

8、腦組織COX-2表達(dá)在觀察的各時(shí)間段內(nèi)表達(dá)無顯著性差異，P＜0.05。除假手術(shù)組外，其余各組同一時(shí)間兩側(cè)比較，均有顯著性差異。到梗死后48h～72h右側(cè)額、頂葉皮質(zhì)中細(xì)胞形態(tài)尚完整的神經(jīng)元呈現(xiàn)陽性染色；梗死后7d陽性細(xì)胞明顯減少，但仍高于假手術(shù)組。腦梗死后病變側(cè)各時(shí)間點(diǎn)陽性細(xì)胞數(shù)與假手術(shù)組比較，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其F值為132.31，P＜0.05；病變對(duì)側(cè)各組之間比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其F值為1.39，P＞0.05。而梗死中心區(qū)可見COX

9、-2微量表達(dá)。 結(jié)論：所采用的線栓法是一種可逆性的MCAO模型，在此基礎(chǔ)上可進(jìn)行缺血再灌注，適用于急、慢性實(shí)驗(yàn)研究，而且不需要特殊設(shè)備。腦梗死模型比較接近人類腦梗死的病理過程和形態(tài)學(xué)特點(diǎn)，可模擬形成的缺血對(duì)腦組織的損害，是腦梗死的基礎(chǔ)研究和治療干預(yù)研究較為理想的動(dòng)物模型。實(shí)驗(yàn)性腦梗死后梗死周圍COX-2的表達(dá)、炎性細(xì)胞的浸潤(rùn)在時(shí)間上具有規(guī)律性，這與腦水腫和行為學(xué)改變規(guī)律相符，提示COX-2高表達(dá)參與了腦梗死后繼發(fā)神經(jīng)元損害和腦水