MDV流行毒株分離鑒定及GX0101感染宿主的病毒動態(tài)轉(zhuǎn)錄組學研究.pdf

1、雞馬立克病（Marek‘s disease，MD）是由馬立克病病毒（Marek‘s disease virus，MDV）感染雞引發(fā)的一種重要的免疫抑制病及腫瘤病。近年來，隨著雞群MD疫苗長期而廣泛的應用，在免疫壓力選擇下MDV對疫苗的免疫耐受不斷加大，毒力越來越強，流行毒株不斷發(fā)生進化。在我國，MDV的流行也導致了MD疫情的頻繁爆發(fā)，給家禽養(yǎng)殖業(yè)造成巨大經(jīng)濟損失。河南作為中國最大的家禽養(yǎng)殖基地，了解河南雞群 MDV的最新流行情況具有重要

2、現(xiàn)實意義。另外， MDV基因組龐大，編碼上百種蛋白，很多蛋白的功能目前仍不清楚，進一步深入研究未知基因功能、挖掘潛在致病因子的任務仍十分艱巨。
　　為了解當前 MDV分子進化特征并為 MD防控提供有效參考，本研究首先應用 PCR擴增和 DNA測序分析對河南焦作土雞群 MD疑似病例進行了確診，并通過 CEF細胞盲傳培養(yǎng)和間接免疫熒光實驗（IFA）分離鑒定了3個流行毒株，分別命名為 HNJZ101、HNJZ102和 HNJZ103。進

3、一步研究結果顯示，3個MDV分離株均為MDV-1毒株、未發(fā)生REV共感染，并且132-bp重復序列均為雙拷貝。基于 meq、gE和 gI基因進行了系統(tǒng)發(fā)生樹分析，結果提示，3個分離株 HNJZ101、HNJZ102和 HNJZ103很可能是當前河南土雞群中流行的致病性MDV-1毒株，其確切的致病型及導致免疫失敗的原因仍有待進一步深入研究。
　　為了給后續(xù)開展 MDV感染及致病致瘤機制等相關研究奠定基礎，本研究用 vvMDV-1毒株

4、 GX0101接種1日齡 SPF雞，建立了動物感染模型，然后用qPCR分析10個具有代表性的MDV蛋白編碼基因的時空表達譜。并結合此前研究鑒定了 GX0101感染宿主的致病階段：早期增殖性-限制性感染期為1～7 d，潛伏感染期約為10 d前后，晚期溶細胞性感染及免疫抑制期發(fā)生于14～21 d，而T細胞轉(zhuǎn)化及淋巴瘤形成階段可能在14 d前后就已經(jīng)開始。
　　為進一步研究MDV編碼基因的轉(zhuǎn)錄組學，本研究應用RNA-Seq技術，對GX0

5、101感染宿主后3、7、14、21、30和60 d的脾臟樣本進行了轉(zhuǎn)錄組高通量測序。測序結果顯示，GX0101的182個病毒編碼基因均可被檢測到，并最終得到了 MDV編碼基因在不同致病階段的動態(tài)表達譜；以3 dpi為對照，采用DEGseq進行基因差異表達分析，分別從7、14、21、30和60 dpi篩選出差異表達基因57、33、70、68和33個，其中上調(diào)基因分別為33、28、37、29和15個，下調(diào)基因分別為24、5、33、39和18