廣西馬立克氏病病毒野毒株的分離與鑒定及其與其它病毒共感染的研究.pdf

1、馬立克氏病(Marek’s disease，MD)是由雞馬立克氏病病毒(Marek，s disease Virus，MDV)引起的一種雞的高度接觸性惡性淋巴腫瘤性疾病，在內(nèi)臟器官、皮膚等處誘發(fā)腫瘤。近年來(lái)，由于MD毒株毒力不斷增強(qiáng)，疫苗免疫效果明顯降低，即使在一些已用CV1988/Rispens株疫苗免疫的雞群，在其生長(zhǎng)后期仍有腫瘤的發(fā)生，給目前的養(yǎng)禽業(yè)帶來(lái)巨大的損失。 為了研究廣西近年來(lái)MDV毒株的流行、分布、毒力變化及其分子

2、衍化規(guī)律，本文采用細(xì)胞培養(yǎng)、間接熒光抗體試驗(yàn)和PCR．?dāng)U增的方法，從曾免疫過(guò)CVl988/Rjspens疫苗株的患MD腫瘤的三黃雞的外周血淋巴細(xì)胞(PBLs)和羽囊液中分離到三株MDV野毒株(分別命名為GXY1、GXY2、GXYL1)。 三株MDV野毒株的細(xì)胞培養(yǎng)中，GXYL1感染的細(xì)胞還能與抗網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增殖病病毒(Reticuloendotheliosis virus，REV)的單抗118118反應(yīng)，也可以用PCR擴(kuò)增出RE

3、V LTR的特異性片段，說(shuō)明這株MDV感染的細(xì)胞中含有傳染性的REV，此病例為MDV和REV共感染；GXY1感染的細(xì)胞不能與單抗118118反應(yīng)，說(shuō)明樣品中不含有游離的REV，但能擴(kuò)增出REV的LTR和已env基因片段，同時(shí)也能擴(kuò)增出禽痘病毒(Fowl poxvirus．FPv)的核蛋白46基因片段，將細(xì)胞培養(yǎng)物上清再接種到DEF單層，然后再用單抗118118進(jìn)行IFA，結(jié)果為陰性，說(shuō)明分離的毒株中不含有游離的REV，而再進(jìn)行LTR、e

4、nv和46基因片段的PCR擴(kuò)增，結(jié)果均為陽(yáng)性，說(shuō)明樣品中的LTR和env基因片段是來(lái)源于細(xì)胞培養(yǎng)物上清中游離的FPV，也就是說(shuō)在野毒GXY1的細(xì)胞培養(yǎng)中含有整合了REV基因組片段的FPV野毒；GXY2感染的細(xì)胞不與單抗118118反應(yīng)，但是能擴(kuò)增出REV的LTR片段，而作為陰性對(duì)照的正常細(xì)胞卻不能擴(kuò)增出REV的LTR片段，說(shuō)明該株MDV的基因組中已整合了REV的LTR片段。 MDV-1 meq基因具有fos/jun群類(lèi)轉(zhuǎn)錄激活因

5、子的特征，被認(rèn)為是一種轉(zhuǎn)錄激活因子，是MDV主要的致瘤基因。通過(guò)對(duì)三株廣西分離的MDV野毒株的meq基因序列與參考株GA和RBlB株及之前我們先前研究的廣西分離株的meq基因序列進(jìn)行比較分析。結(jié)果表明，MDV毒株的meq基因序列相對(duì)比較保守，三株分離株的meq基因在第77、80、115、139、176、217位氨基酸分別存在一致的突變，且氨基酸第80、115、217位所有的廣西分離株都因?yàn)橥粋€(gè)堿基的改變而分別突變?yōu)閅、A、A，與兩個(gè)參

6、考株及疫苗株不同，表現(xiàn)出一定的規(guī)律性。同時(shí)第139位氨基酸突變?yōu)锳，國(guó)外發(fā)表的僅只有一株野毒株的meq基因序列在此位點(diǎn)存在突變，我們國(guó)內(nèi)分離株基本上都發(fā)生了突變，這個(gè)位置的突變國(guó)外還未見(jiàn)報(bào)道，可能與MDV的毒力有關(guān)；而位于脯氨酸重復(fù)區(qū)的與毒力相關(guān)的第176位氨基酸突變?yōu)镽，與國(guó)外發(fā)表的MDV的meq基因序列在此位置的變化(A/H)不同，是我們國(guó)內(nèi)分離株所特有的。這些變化對(duì)于我們研究國(guó)內(nèi)的MDV-1毒株很有意義。本研究結(jié)果表明，廣西目前流