河北省鴨肝炎病毒BD-Ⅰ株的分離鑒定及弱毒株培育.pdf

1、鴨病毒性肝炎是由鴨肝炎病毒(DHV)引起雛鴨的一種傳染病，具有發(fā)病急、傳播迅速、病程短、病死率高等特點(diǎn)。本病在全國(guó)各地都有發(fā)生，是嚴(yán)重危害養(yǎng)鴨業(yè)的主要疾病之一，并常和其他病毒、細(xì)菌混合感染，嚴(yán)重影響了養(yǎng)鴨業(yè)，造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。臨床上主要表現(xiàn)為食欲減退、神經(jīng)癥狀、突然死亡和肝臟腫大出血。病原有3種，其中Ⅰ型鴨肝炎病毒在世界范圍內(nèi)流行，Ⅱ型和Ⅲ型鴨肝炎病毒分別局限于英國(guó)和美國(guó)。不同血清型毒株具有不同的理化和生物學(xué)特性，且無(wú)免疫交叉反應(yīng)。

2、近年來(lái)國(guó)內(nèi)外報(bào)道了Ⅰ型鴨肝炎病毒的變異株，且已完成了病毒基因組的測(cè)序工作，并隨之出現(xiàn)RT-PCR診斷技術(shù)，對(duì)雛鴨病毒性肝炎的診斷和防控具有重要意義。 本研究通過(guò)雞胚尿囊腔接種，對(duì)河北省保定地區(qū)采集的死于疑似鴨病毒性肝炎的病鴨肝組織進(jìn)行病原分離，獲得1個(gè)病毒分離株，命名為BD-I株。該分離株經(jīng)病理學(xué)檢查、理化特性實(shí)驗(yàn)、中和試驗(yàn)、動(dòng)物回歸試驗(yàn)等鑒定為血清I型鴨肝炎病毒(DHV)。證實(shí)引起該鴨場(chǎng)雛鴨發(fā)病和死亡的主要原因?yàn)镈VH所致。

3、 根據(jù)GenBank中已發(fā)表的I型鴨病毒性肝炎病毒(DHV-I)的基因序列，應(yīng)用Primer Premier 5.0軟件設(shè)計(jì)了1對(duì)引物，建立了檢測(cè)DHV-Ⅰ的RT-PCR方法，該法能從DHV-I中擴(kuò)增到506bp的條帶。經(jīng)敏感性、特異性檢測(cè)，證實(shí)為DHV-I的特異性條帶，而新城疫病毒(NDV)、傳染性法氏囊病病毒(IBDV)、鴨瘟病毒(DPV)、番鴨細(xì)小病毒(MPV)、鴨病毒性腫頭出血癥病毒(DSHDV)、鵝細(xì)小病毒(GPV)均為

4、陰性。最低檢測(cè)濃度到128倍稀釋的鴨肝毒(相當(dāng)于500ELD50)。RT-PCR對(duì)河北保定地區(qū)的發(fā)病鴨群的13份鴨病毒性肝炎病料進(jìn)行檢測(cè)，其檢出率為76.92％(10/13)。因此，所建立的RT-PCR檢測(cè)技術(shù)具有特異、快速和敏感的特點(diǎn)，可用于鴨病毒性肝炎病毒的快速診斷。 作者對(duì)實(shí)驗(yàn)室分離的鴨肝炎病毒經(jīng)過(guò)雞胚傳代致弱后，收集雞胚尿囊液毒不同含毒量對(duì)1日齡雛鴨進(jìn)行免疫，并于14日齡時(shí)用新型鴨肝炎強(qiáng)毒進(jìn)行攻毒保護(hù)試驗(yàn)，結(jié)果BD-I-