鴨坦布蘇病毒銅陵株的分離與鑒定.pdf

1、鴨坦布蘇病毒(Duck Tembusu virus，DTMUV)感染是我國(guó)2010年前后爆發(fā)的一種新的傳染病，主要引起雛鴨發(fā)生神經(jīng)癥狀而死亡和蛋鴨的產(chǎn)蛋下降，自爆發(fā)之后，迅速波及上海、浙江、福建、安徽、江蘇、山東等地，給我國(guó)養(yǎng)鴨業(yè)帶來(lái)了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。近年來(lái)，各地學(xué)者對(duì)坦布蘇病毒的分離與鑒定作了相繼報(bào)道，而關(guān)于鴨坦布蘇病毒的致病機(jī)理、發(fā)病特征和流行特點(diǎn)的研究一直都在持續(xù)，對(duì)于該病的預(yù)防和治療既沒(méi)有可用的疫苗也沒(méi)有特征性藥物，因此對(duì)鴨坦布

2、蘇病毒的研究仍然具有非常重要的意義。
　　2015年9月，安徽銅陵地區(qū)某鴨場(chǎng)鴨群突然出現(xiàn)產(chǎn)蛋率明顯下降，甚至出現(xiàn)了較高的死亡率。為了解引發(fā)該病的病原，在臨床診斷的基礎(chǔ)上，對(duì)該場(chǎng)送檢的病鴨進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)，并對(duì)其通過(guò)基因序列測(cè)定及分析，鑒定為鴨坦布蘇病毒感染。在無(wú)菌條件下，分離病鴨病變組織采集病鴨卵巢、輸卵管等組織制成研磨液，并加入雙抗，過(guò)濾除菌。利用PCR對(duì)其進(jìn)行常見(jiàn)水禽病毒進(jìn)行鑒定，鑒定結(jié)果表明，鴨胚尿囊液中禽流感、鴨瘟病毒、鴨

3、圓環(huán)病毒、新城疫病毒未擴(kuò)增出特異性片段，鴨坦布蘇病毒擴(kuò)增出特異性片段，表明銅陵該鴨場(chǎng)存在鴨坦布蘇病毒感染。
　　通過(guò)尿囊腔途徑接種10日齡鴨胚和9日齡SPF雞胚(0.1ml/枚)進(jìn)行傳代培養(yǎng)分離病毒。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，胚胎尿囊膜增厚，肝臟斑駁狀壞死，部分肝臟呈土黃色，腫大出血。收集接種后24h之后120h之內(nèi)死亡雞胚的尿囊液，經(jīng)PCR檢測(cè)呈鴨坦布蘇病毒陽(yáng)性，表明分離得到一株鴨坦布蘇病毒，并將其命名為鴨坦布蘇病毒銅陵株。
　　本研究還

4、通過(guò)倍比稀釋坦布蘇病毒尿囊原液借種SPF雞胚，對(duì)分離株進(jìn)行雞胚的致病性進(jìn)行了初步研究。將5個(gè)梯度病毒液（100，10-1，10-2，10-3，10-4和10-5）分別接種5枚SPF雞胚，根據(jù)接種雞胚的死亡情況，按照Reed-Muench法測(cè)算出分離株坦布蘇病毒的ELD50為10-2.38/0.1ml。
　　動(dòng)物回歸試驗(yàn)，攻毒后第3天開始，攻毒組鴨只采食量、產(chǎn)蛋量開始下降，7天后解剖攻毒組和對(duì)照組鴨只，攻毒組鴨只出現(xiàn)卵巢萎縮、脾臟腫