廣東省114株人腸道病毒分離株的分型鑒定研究.pdf

1、人腸道病毒(HEV)屬小RNA病毒科，是無菌性腦膜炎的主要病因，也可以引起其它急性感染性疾病，包括新生兒膿毒樣疾病、急性弛緩性麻痹(AFP)和急性出血性結(jié)膜炎等。鑒定腸道病毒常用中和法，但這種方法費時費力，有時需要使用乳鼠，標準抗血清的供應也有限。為此我們建立了一套基于逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(RT-PCR)和基因序列分析的鑒別腸道病毒的分子方法。首先測定腸道病毒結(jié)構蛋白VP1部分序列，然后將測得的序列與GenBank中的68個原型株VPl序

2、列進行比較分析，構建種系發(fā)生樹，從而鑒別未知病毒型別。 本研究首先建立了分子定型的方法，然后選取廣東省消滅脊髓灰質(zhì)炎AFP監(jiān)測中從1994年至1998年分離的114株HEV為研究對象，對建立的方法進行評估。采用傳統(tǒng)中和定型方法使用脊髓灰質(zhì)炎病毒1、2、3型標準血清和腸道病毒組合血清對1994年至1998年的腸道病毒分離株進行中和鑒定。使用脊髓灰質(zhì)炎1、2、3型標準血清鑒定了114株病毒中的29株脊髓灰質(zhì)炎病毒，混合毒株也可以鑒別

3、定型；由于組合血清覆蓋的病毒型別范圍有限，114株各年分離的毒株中除29株脊髓灰質(zhì)炎病毒外，46株無法定型，占54﹪(46/85)。 采用基于腸道病毒結(jié)構蛋白VP1基因部分序列種系發(fā)生分析方法對腸道病毒分離株進行定型，114株病毒都成功擴增，并完成了序列測定和分析，除2株無法定型外，其它毒株都能與某個原型株歸在同一組，從而確定毒株的型別；與中和定型結(jié)果相比兩者的符合率為85﹪(58/68)。闡明了使用RD(人橫紋肌肉瘤細胞)細胞