Anti-miR-143通過(guò)上調(diào)癌基因ABL2促進(jìn)腎細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化的研究.pdf

1、目的：探討miR-143在腎細(xì)胞癌中的表達(dá)及意義，及其對(duì)腎細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化過(guò)程中細(xì)胞生物學(xué)行為的影響，并進(jìn)一步探究腎細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化過(guò)程的分子學(xué)機(jī)制。
　　方法：實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)腎細(xì)胞癌組織中和癌旁組織中miR-143的表達(dá)差異，并檢測(cè)腎細(xì)胞癌細(xì)胞株中和正常腎細(xì)胞細(xì)胞株中miR-143的表達(dá)差異。體外轉(zhuǎn)染anti-miR-143后，通過(guò)Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)HK-2細(xì)胞遷移能力的改變；通過(guò)粘附實(shí)驗(yàn)檢測(cè)HK-2細(xì)胞粘附能力的改變。通過(guò)

2、miR-143靶基因預(yù)測(cè)軟件miranda預(yù)測(cè)miR-143在腎細(xì)胞癌的潛在靶基因ABL2；同時(shí)應(yīng)用熒光素酶報(bào)告基因驗(yàn)證miR-143和ABL23’UTR的結(jié)合能力。應(yīng)用Western blotting檢測(cè)轉(zhuǎn)染anti-miR-143后，miR-143靶基因ABL2的表達(dá)。
　　結(jié)果：實(shí)時(shí)定量PCR結(jié)果表明，腎細(xì)胞癌組織中miR-143的表達(dá)水平與癌旁組織相比顯著下降(P＜0.05)；人腎透明細(xì)胞癌皮膚轉(zhuǎn)移細(xì)胞Caki-1、腎癌細(xì)

3、胞786-0中miR-143表達(dá)水平與人腎小管上皮細(xì)胞株HK-2相比顯著下降(P＜0.05)。在Transwell遷移實(shí)驗(yàn)中，轉(zhuǎn)染anti-miR-143后的HK-2細(xì)胞遷移通過(guò)transwell小室的數(shù)量明顯增加(P＜0.05)。在細(xì)胞粘附實(shí)驗(yàn)中，轉(zhuǎn)染anti-miR-143的HK-2細(xì)胞粘附數(shù)量較正常HK-2細(xì)胞明顯增加(P＜0.05)。應(yīng)用靶基因預(yù)測(cè)軟件發(fā)現(xiàn)ABL2是miR-143靶基因之一，3’UTR非保守結(jié)合位點(diǎn)有三個(gè)(ABL

4、2-1，ABL2-2，ABL2-3)，熒光素酶報(bào)告基因結(jié)果表明，分別共轉(zhuǎn)染anti-miR-143和各亞型pMir-reporter-ABL2質(zhì)粒后，熒光報(bào)告基因的熒光強(qiáng)度與共轉(zhuǎn)NC inhibitor和對(duì)應(yīng)亞型pMir-reporter-ABL2質(zhì)粒相比較明顯增強(qiáng)(P＜0.05)。采用Western blotting檢測(cè)潛在靶基因ABL2目的蛋白的表達(dá)情況后，發(fā)現(xiàn)anti-miR-143促進(jìn)ABL2表達(dá)。
　　結(jié)論：以上結(jié)果表明