IL-6通過上皮-間質轉化誘導CD44+CD24--low細胞的產生促進了乳腺癌MCF7細胞的惡性行為.pdf

1、乳腺癌嚴重危害著女性的生命和健康，是全球女性最常見的惡性腫瘤，在北美、北歐一些國家，乳腺癌發(fā)病率占所有女性惡性腫瘤的25％～30％，半個多世紀以來，對乳腺癌的基礎和臨床研究都取得了很大的進展，提高了臨床治療效果，在發(fā)達國家乳腺死亡水平已經在10多年前發(fā)生轉折，由持續(xù)上升轉為顯著下降。亞洲乳腺癌發(fā)病水平在國際上居中等水平，但增長趨勢明顯，死亡率相對較高，與發(fā)達國家相比，中國的乳腺癌發(fā)病年齡較早，2008年，我國小于65歲乳腺癌患者占所有乳

2、腺癌患者的83.4％，中國乳腺癌患者確診的平均年齡為45～55歲，乳腺癌有兩個發(fā)病高峰:45～55歲及70～74歲。眾所周知，月經周期長、未生育、初次生育年齡較大、不哺乳等是乳腺癌的危險因素，對于中國女性來說，獨生子政策使得這些因素更為突出，多生孩子有助于降低乳腺癌風險，此外，肥胖、高脂肪飲食和運動不足也增加乳腺癌風險。通過早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療等二級預防及乳腺癌系統(tǒng)治療的逐漸完善的三級預防，乳腺癌的發(fā)展已經得到有效的控制，病死率有下降

3、的趨勢。早期乳腺癌治療效果已經相當好，五年生存率在90％以上，但不管乳腺癌治療多有效，總還有30％～40％的乳腺癌患者最后會復發(fā)、會出現(xiàn)耐藥。隨著研究的不斷深入，腫瘤干細胞(cancerstem cells，CSCs)學說被科學家提出，他們認為腫瘤干細胞是腫瘤中極小部分具有自我更新、無限增殖及分化潛能的細胞，腫瘤之所以能具有無限增殖能力，其根本在于腫瘤細胞中存在占極少數量的腫瘤干細胞。腫瘤干細胞被認為是腫瘤復發(fā)、轉移及治療抵抗的根源，它

4、對化療和放療都會產生抵抗。研究發(fā)現(xiàn)通過EMT過程能將永生化人乳腺上皮細胞(HMLEs)誘導成具有干細胞特征的乳腺癌干細胞，為EMT在腫瘤細胞的轉移及促進生長中的作用提供了證據，且建立了上皮-間充質轉化與腫瘤干細胞起源之間的聯(lián)系。IL-6是一種介導炎癥反應的主要因子，在腫瘤的病理生理學中起重要的作用。研究顯示，在乳腺癌病人中，血清IL-6的升高水平與不良的疾病預后相關。最近的研究顯示，IL-6是很強的上皮-間充質轉化(Epithelial

5、-mesenchymal transition，EMT)誘導因子，其能誘導上皮表型的乳腺癌細胞株向間充質表型轉化;另一方面，最近報道EMT過程能在體外產生具有干細胞特性的CD44+CD24-/low標記的乳腺癌干細胞亞群[10，11]，而這群細胞具有高致瘤性，對傳統(tǒng)化療藥物抵抗及高度的輻射抵抗能力。因此，我們推測IL-6有可能通過產生具有CD44+CD24-/low標記的乳腺癌干細胞從而介導了乳腺癌細胞的增殖、化療抵抗及輻射抵抗。本研究

6、利用MCF7乳腺癌細胞株模型，深入研究IL-6對誘導MCF7細胞EMT及CD44+CD24-/low乳腺癌干細胞產生的作用，及對MCF7細胞增殖、阿霉素抵抗及輻射抵抗的影響，意在闡明IL-6促進乳腺癌生長、細胞輻射抵抗以及化療抵抗的潛在機制。
　　目的:
　　(1)IL-6能否有效誘導乳腺癌MCF7細胞發(fā)生上皮-間充質轉化;
　　(2)探討誘導后的MCF7是否增加了CD44+CD24-/low標記乳腺癌干細胞的比例;<

7、br>　　(3)分析經誘導后產生的CD44+CD24-/low細胞是否具有更強的增殖、輻射、化療抵抗能力。
　　方法:
　　(1)利用含50ng/ml IL-6的培養(yǎng)基培養(yǎng)MCF7細胞;
　　(2)流式細胞術檢測CD44+CD24-/low乳腺癌干細胞含量的變化;
　　(3)real time-RT-PCR及westernbloting技術檢測上皮-間充質轉化標記分子的表達水平;
　　(4)流式細胞術從誘導

8、組中分選出CD44+CD24-/low乳腺癌干細胞群體;
　　(5)CCK8細胞增殖檢測試劑盒檢測細胞增殖及對阿霉素藥物的敏感性;
　　(6)細胞凋亡檢測試劑盒檢測阿霉素對細胞凋亡的作用;
　　(7)克隆形成實驗檢測誘導后細胞的輻射抵抗能力。
　　結果:
　　(1)IL-6能誘導MCF7細胞發(fā)生上皮-間充質樣轉化
　　(2)誘導5天后CD44+CD24-/low細胞顯著富集
　　(3)IL-6增