AGEs通過(guò)上調(diào)PTEN促進(jìn)人主動(dòng)脈血管平滑肌細(xì)胞的鈣化.pdf

1、目的：探討PTEN與人主動(dòng)脈血管平滑肌細(xì)胞（HASMC）鈣化的潛在關(guān)系，明確PTEN是否能夠介導(dǎo)AGEs促進(jìn)HASMC的鈣化。
　　方法：用不同濃度AGEs（25mg/L、50mg/L、100mg/L）分別作用于三組人主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞進(jìn)行干預(yù)培養(yǎng)，設(shè)正常條件下（91％DMEM高糖培養(yǎng)基+6%胎牛血清+2%生長(zhǎng)因子+1%雙抗）培養(yǎng)的HASMC為一空白對(duì)照組，培養(yǎng)2天后先取部分細(xì)胞提取蛋白，采用western blotting檢測(cè)各組

2、人主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞成骨相關(guān)蛋白OPG、Runx2、BMP2的表達(dá)水平，各組剩余細(xì)胞于培養(yǎng)10天后行茜素紅染色。為明確PTEN是否參與了AGEs促進(jìn)HASMC鈣化的過(guò)程，給予不同濃度（0mg/L、25mg/L、50mg/L、100mg/L）及不同時(shí)間長(zhǎng)度（0h、12 h、24h、48h）AGEs干預(yù)細(xì)胞后，Western blot檢測(cè)HASMCs中PTEN蛋白的表達(dá)水平；引入PTEN特異性抑制劑bpv（Hopic），利用Western b

3、lot選取最佳抑制濃度后干預(yù)培養(yǎng)HASMC，培養(yǎng)2天后先取部分細(xì)胞提取蛋白，采用western blotting檢測(cè)各組人主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞成骨相關(guān)蛋白OPG、Runx2、BMP2的表達(dá)水平，各組剩余細(xì)胞于培養(yǎng)10天后行茜素紅染色。最后，為明確PTEN是否參與了β-磷酸甘油促進(jìn)HASMC鈣化的過(guò)程，用10m mol/Lβ-磷酸甘油、10mmol/Lβ-磷酸甘油+100mg/L AGEs、10mmol/Lβ-磷酸甘油+100mg/L AGE

4、s+200μmol/L bpV（Hopic）分別作用于三組人主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞進(jìn)行干預(yù)培養(yǎng)，設(shè)一空白對(duì)照組，培養(yǎng)2天后先取部分細(xì)胞提取蛋白，采用western blotting檢測(cè)各組人主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞成骨相關(guān)蛋白OPG、Runx2、BMP2的表達(dá)水平，各組剩余細(xì)胞于培養(yǎng)10天后行茜素紅染色。用10mmol/Lβ-磷酸甘油、10mmol/Lβ-磷酸甘油+200μmol/L bpV（Hopic）分別作用于兩組人主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞進(jìn)行干預(yù)培養(yǎng)，

5、設(shè)一空白對(duì)照組，培養(yǎng)2天后先取部分細(xì)胞提取蛋白，采用western blo tting檢測(cè)各組人主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞成骨相關(guān)蛋白OPG、Runx2、BMP2的表達(dá)水平，各組剩余細(xì)胞于培養(yǎng)10天后行茜素紅染色。
　　結(jié)果：（1）用不同濃度AGEs進(jìn)行干預(yù)培養(yǎng)后的HASMC其鈣化程度及成骨相關(guān)蛋白OPG、Run x2、BMP2的表達(dá)水平均高于空白對(duì)照組，且隨著干預(yù)所用AGEs濃度的升高而增強(qiáng)。（2）用不同濃度AGEs進(jìn)行干預(yù)培養(yǎng)的HASM

6、C其PTEN蛋白的表達(dá)水平均高于空白對(duì)照組，且隨著干預(yù)所用AGEs濃度的升高而增強(qiáng)，給予AGEs干預(yù)不同時(shí)間后的HASMC，于48h時(shí)PTEN蛋白的表達(dá)最強(qiáng)。（3） AGEs+bpV（Hopic）干預(yù)組細(xì)胞的鈣化程度及成骨相關(guān)蛋白OPG、Runx2、B MP2的表達(dá)水平均低于單純AGEs干預(yù)組細(xì)胞，但高于空白對(duì)照組。（4）β-磷酸甘油組、β-磷酸甘油+ AGEs組、β-磷酸甘油+AGEs+bpV（Hopic）組細(xì)胞的鈣化程度及成骨相關(guān)蛋

7、白OPG、Runx2、BMP2的表達(dá)水平均高于空白對(duì)照組，其中β-磷酸甘油+AGEs組細(xì)胞的鈣化程度和成骨相關(guān)蛋白的表達(dá)水平最高。（5）β-磷酸甘油組和β-磷酸甘油+ bpV（Hopic）組細(xì)胞的鈣化程度及成骨相關(guān)蛋白OPG、Runx2、BMP2的表達(dá)水平均高于空白對(duì)照組，但兩者之間無(wú)明顯差別。
　　結(jié)論：1.AGEs可促進(jìn)人主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞的鈣化及成骨相關(guān)蛋白OPG、RUNX2、BMP2的表達(dá)，AGEs可上調(diào)人主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞中