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文檔簡介
1、目的:
觀察熊果酸(UA)對人主動脈血管平滑肌細(xì)胞(HASMC)增殖及GRIM-19、p-STAT3、CyclinD1蛋白的表達(dá)的影響,探討三者與人主動脈血管平滑肌細(xì)胞增殖的相關(guān)性,闡釋熊果酸對人主動脈血管平滑肌細(xì)胞的作用及可能機(jī)制。
方法:
復(fù)制高脂血清誘導(dǎo)的HASMC增殖模型,分為:正常組、15%高脂血清組、20%高脂血清組、UA給藥組(10μM,20μM,30μM),采用CCK8方法檢測不同時間點HA
2、SMC的增殖活性;RT-PCR和Western Blot方法檢測各組細(xì)胞GRIM-19、STAT3/p-STAT3、Cyclin-D1的mRNA及蛋白水平;應(yīng)用RNA干擾和質(zhì)粒過表達(dá)技術(shù),驗證信號分子間的級聯(lián)關(guān)系;WB技術(shù)檢測干擾效率和目的蛋白表達(dá)及干擾和過表達(dá)GRIM-19后,HASMC中GRIM-19、p-STAT3、Cyclin-D1蛋白表達(dá)的變化。
結(jié)果:
(1)CCK8檢測結(jié)果顯示,15%高脂血清培養(yǎng)HAS
3、MC24h可顯著提高細(xì)胞增殖率;分別加入UA(10μM、20μM、30μM)作用12h,均有明顯的細(xì)胞抑制作用,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);
(2)mRNA和蛋白水平上,與模型組相比,正常組中內(nèi)源性GRIM-19的表達(dá)高于模型組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);
(3)正常組中內(nèi)源性GRIM-19呈現(xiàn)高表達(dá),同時伴隨有p-STAT3和CyclinD1出現(xiàn)低表達(dá);增殖組中內(nèi)源性GRIM-19出現(xiàn)低表達(dá),與此同時
4、伴隨有p-STAT3和CyclinD1出現(xiàn)高表達(dá),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);
(4)UA作用于HASMC后,較增殖組相比,加藥組中內(nèi)源性GRIM-19蛋白表達(dá)增高,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);
(5)加入p-STAT3抑制劑后,CyclinD1蛋白表達(dá)水平降低,結(jié)果提示p-STAT3很可能是CyclinD1的上游;
(6)siRNA沉默GRIM-19后,p-STAT3蛋白水平和CyclinD
5、1蛋白水平表達(dá)均呈現(xiàn)增高趨勢,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),提示GRIM-19負(fù)向調(diào)控p-STAT3和CyclinD1;
(7)轉(zhuǎn)染GRIM-19過表達(dá)質(zhì)粒后,p-STAT3和CyclinD1蛋白水平表達(dá)明顯降低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),進(jìn)一步提示GRIM-19負(fù)向調(diào)控p-STAT3和CyclinD1蛋白的表達(dá)。
結(jié)論:
(1)HASMC中存在內(nèi)源性GRIM-19蛋白的表達(dá);
(2)
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