熊果酸抗人主動脈血管平滑肌細(xì)胞的增殖作用及機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　觀察熊果酸(UA)對人主動脈血管平滑肌細(xì)胞(HASMC)增殖及GRIM-19、p-STAT3、CyclinD1蛋白的表達(dá)的影響，探討三者與人主動脈血管平滑肌細(xì)胞增殖的相關(guān)性，闡釋熊果酸對人主動脈血管平滑肌細(xì)胞的作用及可能機(jī)制。
　　方法：
　　復(fù)制高脂血清誘導(dǎo)的HASMC增殖模型，分為：正常組、15%高脂血清組、20%高脂血清組、UA給藥組(10μM，20μM,30μM)，采用CCK8方法檢測不同時間點HA

2、SMC的增殖活性；RT-PCR和Western Blot方法檢測各組細(xì)胞GRIM-19、STAT3/p-STAT3、Cyclin-D1的mRNA及蛋白水平；應(yīng)用RNA干擾和質(zhì)粒過表達(dá)技術(shù)，驗證信號分子間的級聯(lián)關(guān)系；WB技術(shù)檢測干擾效率和目的蛋白表達(dá)及干擾和過表達(dá)GRIM-19后，HASMC中GRIM-19、p-STAT3、Cyclin-D1蛋白表達(dá)的變化。
　　結(jié)果：
　　(1)CCK8檢測結(jié)果顯示，15%高脂血清培養(yǎng)HAS

3、MC24h可顯著提高細(xì)胞增殖率；分別加入UA(10μM、20μM、30μM)作用12h,均有明顯的細(xì)胞抑制作用，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；
　　(2)mRNA和蛋白水平上，與模型組相比，正常組中內(nèi)源性GRIM-19的表達(dá)高于模型組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；
　　(3)正常組中內(nèi)源性GRIM-19呈現(xiàn)高表達(dá)，同時伴隨有p-STAT3和CyclinD1出現(xiàn)低表達(dá)；增殖組中內(nèi)源性GRIM-19出現(xiàn)低表達(dá)，與此同時

4、伴隨有p-STAT3和CyclinD1出現(xiàn)高表達(dá)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；
　　(4)UA作用于HASMC后，較增殖組相比，加藥組中內(nèi)源性GRIM-19蛋白表達(dá)增高，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；
　　(5)加入p-STAT3抑制劑后，CyclinD1蛋白表達(dá)水平降低，結(jié)果提示p-STAT3很可能是CyclinD1的上游；
　　(6)siRNA沉默GRIM-19后，p-STAT3蛋白水平和CyclinD

5、1蛋白水平表達(dá)均呈現(xiàn)增高趨勢，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，提示GRIM-19負(fù)向調(diào)控p-STAT3和CyclinD1；
　　(7)轉(zhuǎn)染GRIM-19過表達(dá)質(zhì)粒后，p-STAT3和CyclinD1蛋白水平表達(dá)明顯降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05),進(jìn)一步提示GRIM-19負(fù)向調(diào)控p-STAT3和CyclinD1蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)論：
　　(1)HASMC中存在內(nèi)源性GRIM-19蛋白的表達(dá)；
　　(2)