脂多糖干預(yù)氣道上皮細(xì)胞細(xì)胞因子及蛋白激酶C表達(dá)的研究.pdf

1、目的:
　　脂多糖(Lipopolysaccharide LPS)能夠干預(yù)氣道上皮細(xì)胞分泌多種細(xì)胞因子。目前研究較多的參與LPS干預(yù)氣道上皮細(xì)胞分泌細(xì)胞因子的信號(hào)通路主要為p38絲裂原活化的蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase MAPK)、c-Jun N端蛋白激酶（c-Jun N-terminal protein kinase JNK）及細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶1/2（extracellular s

2、ignal-regulated kinase1/2 ERK1/2）。蛋白激酶C(protein kinase CPKC)信號(hào)通路也是一種常見的細(xì)胞信號(hào)通路，有研究證明PKC參與Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞分泌細(xì)胞因子的過程，而且能夠影響血腦屏障以及腸上皮屏障功能，那么PKC是否也參與LPS干預(yù)氣道上皮細(xì)胞分泌細(xì)胞因子的過程，目前尚缺乏相關(guān)研究。本實(shí)驗(yàn)主要檢測(cè)不同時(shí)相不同濃度LPS干預(yù)氣道上皮細(xì)胞后細(xì)胞因子(IL-1、IL-6、IL-8、IL-11)

3、分泌量的變化以及PKC表達(dá)量的變化，從而探索PKC在脂多糖干預(yù)氣道上皮細(xì)胞細(xì)胞因子分泌中的作用。
　　方法:
　　用培養(yǎng)貼壁細(xì)胞的方法培養(yǎng)具有氣道上皮細(xì)胞特性的A549細(xì)胞株，用不同濃度的LPS干預(yù)饑餓24h后的同等數(shù)量的A549細(xì)胞，分為對(duì)照組（LPS干預(yù)濃度為0μg/ml）和實(shí)驗(yàn)組（LPS干預(yù)濃度為0.1μg/ml、1μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、30μ g/ml、50μg/ml和100μg/ml），分別在

4、刺激2h、4h、8h、24h、30h和48h以后收集細(xì)胞上清液及細(xì)胞總蛋白，用ELASA方法檢測(cè)A549細(xì)胞IL-1、IL-6、IL-8和IL-11的分泌量，用western blotting方法檢測(cè)相應(yīng)的PKC的表達(dá)量。
　　結(jié)果:
　　1、不同濃度LPS干預(yù)A549細(xì)胞相同時(shí)間后細(xì)胞因子IL-1、IL-6、IL-8和IL-11的分泌量及PKC的表達(dá)量之間的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.001);在所有時(shí)相點(diǎn)，IL-1的分泌

5、量及PKC的表達(dá)量達(dá)到最大時(shí)與空白對(duì)照組相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.001);在某些時(shí)相點(diǎn)，IL-6(2h、4h、24h、48h)、IL-8(2h、4h、8h、24h、30h)和IL-11(2h、8h、24h、30h、48h)的分泌量達(dá)到最大時(shí)與空白對(duì)照組相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.001)，而IL-6的分泌量在8h和30h表現(xiàn)為下降趨勢(shì)。
　　2、PKC蛋白的表達(dá)量和IL-11的分泌量之間具有相關(guān)性(R=0.127)

6、，相關(guān)性分析具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.049)。
　　結(jié)論:
　　1、LPS可以干預(yù)細(xì)胞因子IL-1、IL-6、IL-8和IL-11的分泌及PKC的表達(dá);在某些時(shí)相點(diǎn)，LPS能夠使氣道上皮細(xì)胞細(xì)胞因子IL-1(2h、4h、8h、24h、30h、48h)、IL-8(2h、4h、8h、24h、30h)、IL-11(2h、8h、24h、30h、48h)的分泌量及PKC的表達(dá)量增加;而IL-6的分泌量和LPS干預(yù)濃度之間無明顯的濃度依