版權說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權,請進行舉報或認領
文檔簡介
1、目的:
研究蛋白激酶C-α(PKC-α)對內(nèi)髓集合管上皮細胞系(mIMCD3)骨架actin的影響,初步探討PKC-α在集合管對尿液物質轉運的作用機制及意義。
方法:
常規(guī)體外培養(yǎng)mIMCD3細胞,提取四種不同的PKC-α基因的重組體,脂質體介導其轉染入mIMCD3細胞,用PKC-α基因的表達載體抗性基因藥物G418篩選后獲得穩(wěn)定轉染細胞,隨機分為①空質粒轉染組(K組):轉染PKC-α基因空質粒
2、重組體的細胞②野生型轉染組(W組):轉染PKC-α基因野生型質粒重組體的細胞③顯性激活型質粒轉染組(A組):轉染PKC-α基因顯性激活型質粒重組體的細胞④顯性滅活型質粒轉染組(R組):轉染PKC-α基因顯性滅活型質粒重組體的細胞。轉染后24h顯微鏡下觀察轉染細胞的熒光表達情況,評估轉染效率;轉染后72h細胞用含有G418藥物的培養(yǎng)基培養(yǎng),并最終獲得穩(wěn)定表達PKC-α基因的細胞。Real-time 實時熒光定量PCR檢測上述各組穩(wěn)轉細胞的
3、PKC-α mRNA表達水平變化,western blot檢測各組穩(wěn)轉細胞中PKC-α蛋白表達及其活性,細胞免疫化學方法檢測各組穩(wěn)轉細胞骨架actin的結構變化。
結果
⑴ 成功獲取了穩(wěn)定表達不同PKC-α基因重組體的mIMCD3細胞系。⑵ 熒光顯微鏡下觀察轉染后24h細胞熒光表達情況,轉染效率平均為36±2%。⑶ Real-time 熒光定量PCR結果顯示:A組、W及R組 PKC-α mRN
4、A表達較K組明顯升高(p<0.05),而A組、W及R組三組間比較,變化不明顯(p>0.05)。Western blot結果顯示:A組、R組及W組PKC-α蛋白表達較K組明顯升高(p<0.05),而W組、A組與R組三組間比較,沒有明顯差別(p>0.05);PKC-活性檢測顯示A組與其它三組比較活性明顯升高(p<0.05),R組活性較其它組明顯下降(p<0.05)。⑷細胞免疫化學顯示:K組及W組主要分布在細胞頂膜周邊,兩組間沒有較大區(qū)別,而
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負責。
- 6. 下載文件中如有侵權或不適當內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 蛋白激酶Cε在尿蛋白所致腎小管上皮細胞損傷中的作用.pdf
- 非經(jīng)典型蛋白激酶C(ζ、τ)在尿蛋白誘導的腎小管上皮細胞轉分化中的作用.pdf
- 胃癌耐藥細胞系傳統(tǒng)型蛋白激酶c的表達及活性
- 脂多糖干預氣道上皮細胞細胞因子及蛋白激酶C表達的研究.pdf
- 奶牛乳腺上皮細胞系的建立.pdf
- 新生山羊小腸上皮細胞系的建立.pdf
- 醛固酮對皮質集合管上皮細胞VEGF表達的調(diào)控.pdf
- 用于制備抗菌肽的山羊成纖維細胞系與雞輸卵管上皮細胞系的建立.pdf
- AKT蛋白激酶調(diào)控人類晶狀體上皮細胞間質轉化的功能初探.pdf
- 辛伐他汀對人腎小管上皮細胞內(nèi)皮細胞蛋白C受體及血栓調(diào)節(jié)蛋白的影響.pdf
- 中國倉鼠卵巢上皮細胞和爪蟾卵母細胞蛋白激酶C亞型的不同對Kir電流抑制作用的影響.pdf
- 奶山羊乳腺上皮細胞系的建立.pdf
- 山羊乳腺上皮細胞系的建立與培養(yǎng).pdf
- 自噬對組蛋白介導的人腎小管上皮細胞凋亡的影響.pdf
- Cubilin介導白蛋白激活腎小管上皮細胞的研究.pdf
- 人視網(wǎng)膜色素上皮細胞吞噬功能與MERTK基因表達及蛋白激酶C調(diào)控關系的研究.pdf
- 幽門螺桿菌毒素蛋白Tipα對人胃黏膜上皮細胞系GES-1的影響.pdf
- 高濃度葡萄糖及蛋白激酶C抑制劑對內(nèi)皮功能的影響.pdf
- 葡多酚對肝細胞蛋白激酶C的影響作用研究.pdf
- 大黃素對白蛋白誘導人腎小管上皮細胞轉分化的影響.pdf
評論
0/150
提交評論