小麥不同外植體農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化體系研究.pdf

1、目前為止，小麥幼胚是利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法成功轉(zhuǎn)化小麥的唯一外植體，Bobwhite是常用的基因型，不但小麥幼胚的取材受季節(jié)的嚴格限制，而且存在著基因型單一、轉(zhuǎn)化效率不穩(wěn)定等缺點。篩選對農(nóng)桿菌敏感的小麥基因型，建立或完善農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化小麥成熟胚、幼穗和幼胚的技術(shù)體系，同時將一些與性狀改良有關(guān)的功能基因?qū)胄←?，對于小麥新品種選育和功能基因組研究具有重要意義。本研究選用來自全國各地的91個小麥基因型，分別以其成熟胚、幼穗和幼胚為受體材料進行農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)

2、化，通過GUS基因的瞬間表達篩選對農(nóng)桿菌敏感的小麥基因型，通過對受體材料處理方式和共培養(yǎng)方式的比較等技術(shù)環(huán)節(jié)的研究，將高分子量麥谷蛋白亞基編碼基因154X、154Y、WT和標(biāo)記基因nptⅡ、報告基因GUS導(dǎo)入小麥。 通過農(nóng)桿菌侵染后GUS基因瞬間表達，從80個小麥品種中篩選到了97H2169、輪選208、豫麥66、揚麥6號等基因型，其幼胚對農(nóng)桿菌感染非常敏感，GUS基因表達率達到了50.0％-93.3％。從83個小麥品種中篩選到

3、京冬8號、CA9924、西農(nóng)2611、京冬11等基因型的幼穗經(jīng)對農(nóng)桿菌感染比較敏感，GUS基因瞬間表達率達到了60.0％-82.8％，多數(shù)基因型的幼穗對農(nóng)桿菌感染不敏感。對小麥?zhǔn)荏w組織與農(nóng)桿菌的共培養(yǎng)方式進行了比較，結(jié)果表明，濾紙上共培養(yǎng)方式更有利于農(nóng)桿菌對小麥三種不同外植體的侵染，濾紙上共培養(yǎng)方式GUS基因表達率平均比固體培養(yǎng)基共培養(yǎng)方式高16.6％。對小麥成熟胚在農(nóng)桿菌感染前采用了三種不同的處理方法，結(jié)果表明，成熟胚縱切成兩半后直接