農(nóng)桿菌介導(dǎo)的西瓜遺傳轉(zhuǎn)化體系的研究.pdf

1、我國的西瓜年產(chǎn)量居世界首位，但因常規(guī)育種周期比較長，使西瓜的種質(zhì)創(chuàng)新與新品種的提供無法滿足市場需求。通過基因工程的方法來改良西瓜品質(zhì)，已成為一種選育西瓜新品種的有效途徑。近年隨著對類胡蘿卜素營養(yǎng)保健功能的廣泛認(rèn)識，越來越多的學(xué)者對西瓜瓤中類胡蘿卜素組成及合成途徑進(jìn)行深入研究，以期通過轉(zhuǎn)基因技術(shù)提高西瓜中類胡蘿卜素的含量，并進(jìn)行種質(zhì)創(chuàng)新。本試驗(yàn)建立西瓜子葉組織培養(yǎng)體系和子葉遺傳轉(zhuǎn)化體系，正是為要開展西瓜類胡蘿卜素基因工程及其代謝調(diào)控探究提

2、供技術(shù)保障。
　　試驗(yàn)以西瓜子葉為外植體，研究子葉苗齡、不同激素濃度對子葉誘導(dǎo)分化影響以及再生條件，建立西瓜子葉離體高效組織培養(yǎng)體系。然后用西瓜子葉作為受體，研究預(yù)培養(yǎng)、農(nóng)桿菌侵染和共培養(yǎng)時間對抗性芽分化的影響，以及不同抗生素濃度對西瓜子葉生長情況的影響，建立農(nóng)桿菌介導(dǎo)的PSY基因遺傳轉(zhuǎn)化體系。
　　通過試驗(yàn)，取得以下結(jié)果:
　　(1)建立了以西瓜子葉作為外植體的組織培養(yǎng)體系。通過對西瓜子葉組織培養(yǎng)幾個關(guān)鍵因素的試驗(yàn)，

3、發(fā)現(xiàn)本試驗(yàn)條件下適宜的培養(yǎng)條件為:子葉苗齡的適宜時間為4d，子葉苗齡較短和較長都不利于不定芽的分化，子葉在黑暗條件培養(yǎng)一段時間的分化率較高，適宜培養(yǎng)基為MS+6-BA2.0mg/L+IBA0.5mg/L+30g/L蔗糖+7g/L瓊脂和MS+6-BA2.0mg/L+IAA0.5mg/L+30g/L蔗糖+7g/L瓊脂。
　　(2)建立了農(nóng)桿菌介導(dǎo)的西瓜子葉遺傳轉(zhuǎn)化體系。以4d苗齡的子葉為受體，研究不同侵染時間(15，30，45，60m

4、in)、預(yù)培養(yǎng)時間(2，3d)、共培養(yǎng)時間(2，3，4d)對抗性芽分化的影響，也研究了抗生素(Kan、Amp、Cef)對西瓜子葉生長情況的影響。試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)75mg/L的Kan能夠很好的篩選出抗性芽，兩周之內(nèi)，200mg/L的Amp和400mg/L的Cef能夠較好的抑制農(nóng)桿菌大量的繁殖。預(yù)培養(yǎng)時間2d為宜，菌液侵染15min，接入MS+6-BA2.0mg/L+IBA0.5mg/L+Kan75mg/L+Amp200mg/L+30g/L蔗糖+7