黃瓜離體培養(yǎng)及根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化體系的研究.pdf

1、黃瓜(Cucumis sativus L)是世界范圍內(nèi)的重要蔬菜，由于現(xiàn)有栽培品種的遺傳基礎(chǔ)十分狹窄，與黃瓜屬其他野生資源遠(yuǎn)緣雜交的親合性很低，采用傳統(tǒng)育種方法很難在短時(shí)間內(nèi)獲得具有對(duì)生物或非生物具有抗性的優(yōu)良品種。利用植物基因工程進(jìn)行對(duì)黃瓜現(xiàn)有品種進(jìn)行遺傳改良是擴(kuò)大現(xiàn)有資源遺傳基礎(chǔ)的有效途徑。為此，本試驗(yàn)建立了穩(wěn)定的黃瓜再生、遺傳轉(zhuǎn)化體系，主要結(jié)果如下： 1、黃瓜再生體系的建立：通過(guò)比較兩種野生型黃瓜品種的不同外植體，發(fā)現(xiàn)歐洲

2、型黃瓜EP-6適合用子葉為外植體誘導(dǎo)再生植株，華北型黃瓜津春4號(hào)適合用莖節(jié)作為外植體誘導(dǎo)再生植株。適合EP-6子葉再生芽的最佳芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為fMS+0.5mg/LABA+2.0mg/L6-BA+2.0mg/LAgNO3)；適合津春4號(hào)莖節(jié)再生芽的最佳誘導(dǎo)培養(yǎng)基為(MS+0.5mg/L6-BA)；最佳生根培養(yǎng)基為(1趁MS+15g/L蔗糖十0.6mg/LIBA)。 2、EP-6子葉轉(zhuǎn)化體系的建立：將子葉在上述最佳誘芽培養(yǎng)基上預(yù)培養(yǎng)

3、2d，以菌液pCAMBIA2201/EHA105侵染20min，在含50μmol/LAS的最佳芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中黑暗條件下共培養(yǎng)2d，轉(zhuǎn)入選擇培養(yǎng)基(最佳誘芽培養(yǎng)基+100mg/LKan+400mg/L，Cef)中篩選抗性芽，光照條件下培養(yǎng)，25d左右有抗性芽長(zhǎng)出時(shí)轉(zhuǎn)入伸長(zhǎng)培養(yǎng)基中培養(yǎng)?？剐匝?cm左右時(shí)轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基，獲得抗性株系，伸長(zhǎng)培養(yǎng)和生根培養(yǎng)時(shí)添加60mg/L Kan和400mg/L，Cef進(jìn)行篩選。 3、津春4號(hào)的莖節(jié)轉(zhuǎn)

4、化體系的建立：將莖節(jié)在最佳誘芽培養(yǎng)基上預(yù)培養(yǎng)2d，以菌液pCAMBIA2201/EHA105侵染20min，在含50μmo/LAS的最佳芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中黑暗條件下共培養(yǎng)2d，轉(zhuǎn)入選擇培養(yǎng)基(最佳誘芽培養(yǎng)基+120 mg/LKan+400 mg/LCef)中篩選抗性芽，光照條件下培養(yǎng)，12d左右有抗性芽長(zhǎng)出時(shí)轉(zhuǎn)入伸長(zhǎng)培養(yǎng)基中培養(yǎng)?？剐匝?cm左右時(shí)轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)，獲得抗性株系，伸長(zhǎng)培養(yǎng)和生根培養(yǎng)時(shí)添加80mg/L Kan和400mg/L Ce