一個(gè)成骨不全家系的突變篩查.pdf

1、成骨不全(osteogenesis imperfecta，OI)是一種常染色體顯性遺傳為主的單基因遺傳病。約每?jī)扇f(wàn)個(gè)新生兒中就有一個(gè)OI患兒，以中國(guó)2002年-2011年10年的人口出生數(shù)推算，平均每年約有800個(gè)患兒。成骨不全臨床表現(xiàn)主要為骨折和骨畸形，部分伴有藍(lán)鞏膜、耳聾等癥狀。根據(jù)臨床癥狀，成骨不全癥可分為Ⅰ型—Ⅶ型，其中，Ⅰ型癥狀最輕，Ⅱ型最嚴(yán)重。該病90％是由于COL1A1/COL1A2基因突變導(dǎo)致Ⅰ型膠原蛋白結(jié)構(gòu)或骨含量的改

2、變。
　　 目的：通過(guò)臨床資料分析本研究收集的1個(gè)成骨不全家系的遺傳方式，鑒定該家系的OI分型，確定突變篩查的候選基因，尋找突變位點(diǎn)，以闡明該家系的遺傳基礎(chǔ)，為該病的診斷、預(yù)防和遺傳咨詢(xún)工作提供依據(jù)。
　　 方法：本研究收集了一個(gè)來(lái)自中國(guó)河南的家系，共有35名家族成員，其中13人為患者，臨床表現(xiàn)為輕度骨質(zhì)脆弱，無(wú)骨骼畸形，身高正?；蛏园?，鞏膜為藍(lán)色或淡藍(lán)色，牙質(zhì)發(fā)育正?；蛏L(zhǎng)不全皆有。通過(guò)家系患者的臨床癥狀與Sillen

3、ce提出的經(jīng)典分型標(biāo)準(zhǔn)的比對(duì)，其臨床表現(xiàn)和癥狀的嚴(yán)重程度最接近Ⅰ型成骨不全的特征，并確定突變篩查的目的基因。抽取家系部分成員的外周血，抽提DNA并將先證者淋巴細(xì)胞建株。應(yīng)用PCR擴(kuò)增的方法對(duì)先證者及兒子的COL1A1基因所有的外顯子與部分內(nèi)含子區(qū)域進(jìn)行突變檢測(cè)，然后以建株的患者來(lái)源淋巴細(xì)胞系為材料，用RT-PCR和cDNA測(cè)序來(lái)研究突變對(duì)COL1A1基因剪接的影響。
　　 結(jié)果：⑴突變篩查結(jié)果:該家系患者的COL1A1基因上發(fā)現(xiàn)

4、一個(gè)未見(jiàn)報(bào)道的剪接位點(diǎn)突變c.3207+1G＞A。⑵RT-PCR和cDNA測(cè)序結(jié)果:對(duì)逆轉(zhuǎn)錄后的cDNA進(jìn)行序列分析顯示，在c.3200位后出現(xiàn)大量套峰，推測(cè)該突變導(dǎo)致COL1A1基因轉(zhuǎn)錄后產(chǎn)生異常剪接本。cDNA克隆測(cè)序后發(fā)現(xiàn)該家系患者的COL1A1基因表達(dá)存在兩個(gè)剪接本，其中一個(gè)剪接本為正常剪接本，另一個(gè)在43號(hào)外顯子上缺失了8個(gè)堿基r.3200-3207del，導(dǎo)致COL1A1基因的閱讀框發(fā)生改變，Ⅰ型膠原蛋白α1鏈第1067位后