成骨不全四家系基因突變檢測及基因型表型關系分析.pdf

1、成骨不全(Osteogenesis Imperfecta，OI)是一種全身性遺傳性結締組織疾病，根據(jù)其臨床表現(xiàn)及體征的不同，目前分為7種類型，研究表明90％以上的OI患者具有Ⅰ型膠原基因(COL1A1/COL1A2基因)的改變，其中尤以COL1A1基因的改變?yōu)橹?；OI的基因型表型關系目前還不十分明確，但分子遺傳學研究表明，OI臨床表現(xiàn)與突變基因具有一定的相關性，不同人種及家系的基因突變各有特點，并常常具有私有性突變。OI基因水平的研究目

2、前已成為國內外研究的一個熱點，迄今國外已報道了千余種導致OI表型的Ⅰ型膠原基因的突變，但在我國OI的研究仍主要停留在臨床個案報道及影像學報告的階段，基因突變水平的研究還比較少見。
　　 目的
　　 本研究選取國內4個OI先證者家系，通過臨床查體、病史問詢、家系調查及基因突變的檢測，明確各家系中患病個體的臨床診斷分型，尋找基因突變位點，明確遺傳方式，并探討中國人群OI基因型與表型的關系，以豐富中國人群在這方面的資料，為該病

3、的診斷預防及遺傳咨詢工作奠定一定的基礎，并為將來可能的基因治療提供理論依據(jù)。
　　 方法：
　　 本研究選取2008年6月至2009年6月就診于鄭州大學第三附屬醫(yī)院門診的河南省內的四個OI先證者，分別對其家系患病成員及部分健康成員進行臨床體格檢查、病史及家系調查，以收集臨床資料，繪制不同家系的遺傳圖譜，確定各家系的遺傳方式，根據(jù)sillence提出的經(jīng)典分型標準對各家系中患病個體進行臨床診斷分型；然后經(jīng)患者本人及家屬知情

4、同意，并經(jīng)醫(yī)院倫理委員會同意批準，抽取家系中患病成員及部分健康成員的外周血液標本，提取血液標本的白細胞基因組DNA，應用PCR擴增的方法對四個先證者的COL1A1/COL1A2上所有的啟動子，外顯子及外顯子-內含子區(qū)域進行基因擴增及基因突變檢測，應用DNA直接測序法對4例先證者的Ⅰ型膠原基因(COL1A1/COL1A2基因)片段進行測序，然后應用生物信息學軟件對測序結果與Genbank標準序列進行對比分析，以尋找基因突變的位點及形式，最

5、后根據(jù)四個先證者的基因檢測結果，分別對各家系其他成員的血液標本進行COL1A1/COL1A2基因的突變檢測及測序，并應用生物信息學軟件加以分析。
　　 結果：
　　 (1)臨床診斷分型結果：先證者一診斷為Ⅳ型OI，先證者一母親診斷為Ⅰ型OI；先證者二診斷為Ⅰ型OI；先證者三及其父親，姑姑均診斷為Ⅰ型OI；先證者四及其母親均為Ⅰ型OI。
　　 (2)基因檢測及測序結果：在先證者一及其家系患病個體中檢測到COL1A1

6、基因上第36外顯子c.2473位點G>A的突變，先證者二在COL1A1基因上第26內含子剪切位點處檢測到c.1821+1位點G>A的突變，先證者四及其家系患病個體中檢測到COL1A1基因上第9個內含子剪切位點處c.697-2位點C>T的突變，先證者三及四個家系中所有非患病成員個體均未檢測到COL1A1/COL1A2基因上的突變。
　　 結論：
　　 (1)COL1A1基因的改變可以導致成骨不全，也是引起中國人群成骨不全的