遲發(fā)性耳聾家系臨床表型及相關(guān)基因突變研究.pdf

1、目的:耳聾是導(dǎo)致人類交流障礙最常見的疾病，其病因中最主要的因素為遺傳因素，而聽力正常人群中耳聾基因的攜帶率并不低，這也是耳聾發(fā)病率之所以居高不下的重要原因之一。雖然目前國內(nèi)外學(xué)者對遺傳性耳聾的研究很多，但仍有一部分耳聾病人無法確定其致病原因。本課題組收集了5個遲發(fā)性耳聾家系，擬通過分析和總結(jié)其臨床表型的特征與基因型的相關(guān)性，探討常見遲發(fā)性耳聾家系的分子基因，為這些家庭提供遺傳咨詢和婚育指導(dǎo)，力爭豐富遺傳性耳聾基因突變譜。
　　方法

2、:收集病例，采集家系信息，分別編號為:HBZ-01、HBZ-02、HBX、HBD、HBM。收集家系成員血液樣本，提取外周靜脈血基因組DNA，采取PCR擴增后直接測序，首先篩查國人常見突變基因，包括GJB2、SLC26A4以及線粒體基因（mtDNA12SrRNA）。篩查陽性者，分析其臨床表型與基因型的相關(guān)性，對耳聾患者及家庭成員提供遺傳咨詢;篩查陰性者，依據(jù)表型相似性原則，在目前已定位的DFNA中篩選可疑致病基因，陽性者，同前;陰性者，進

3、行耳聾基因組高通量測序，分析可疑的致病基因位點，陽性者對該突變點進行PCR擴增，擴增產(chǎn)物進行Sanger測序驗證，依舊為陰性者下一步將考慮進行全外顯子組測序。
　　結(jié)果:
　　1.在1個遺傳方式不明的耳聾小家系(HBZ-01家系)中檢測出GJB2基因的復(fù)合雜合突變c.35insG/c.232G＞A，家系耳聾成員中相同的突變類型卻出現(xiàn)不同的臨床表型，患者發(fā)病年齡為0～20歲，均為感音神經(jīng)性耳聾，語后聾患者早期表現(xiàn)為高頻聽力下降

4、，后逐漸累及中、低頻。c.35insG/c.232G＞A復(fù)合雜合突變在HBZ-01家系內(nèi)與耳聾表型共分離。初步結(jié)果顯示，在耳聾人群中GJB2基因的這種復(fù)合雜合突變較少。
　　2.在1個表現(xiàn)為常染色體顯性遺傳非綜合征型耳聾的河北家系(HBZ-02家系)中，發(fā)現(xiàn)該家系的表型中除了聽力下降外，部分患者還伴有前庭功能障礙。我們將可能的致病基因鎖定在已報道的COCH基因上，篩查后在其第4和11外顯子上發(fā)現(xiàn)了新的突變位點，其中第4外顯子上為致

5、病位點，c.226G＞A(p.76A＞T)，該突變與臨床表型共分離，在多個物種間亦為保守性序列。第11外顯子上為c.1055G＞A(p.352T＞S)，后經(jīng)驗證發(fā)現(xiàn)該位點為多態(tài)性改變。COCH基因是為數(shù)不多的耳蝸和前庭共相關(guān)基因，對其分子機制的全面認(rèn)識還需深入的研究。HBZ-02家系的臨床表型與以往報道的DFNA9家系相似，這也進一步證實了表型相似性原則，準(zhǔn)確判斷特征性的遺傳性耳聾表型對指導(dǎo)基因型分析具有重要意義。
　　3.在1個

6、常染色體顯性非綜合征型耳聾家系(HBX家系)中首次發(fā)現(xiàn)了中國人群中報道較少見的EYA4基因突變，c.544_545insA，該位點突變位于EYA4基因第8外顯子，導(dǎo)致氨基酸的移碼突變(p.E182X)，c.544545insA突變在HBX家系家系內(nèi)與耳聾表型共分離。與以往國外報道的DFNA10家系不同的是，該家系聽力曲線圖不是典型的“谷型”圖而是平坦型或陡降型，發(fā)病年齡跨度較大，分布在20～40歲之間，部分成員伴有耳鳴。該突變也是首次發(fā)

7、現(xiàn)的新突變。
　　4.其他2個家系（HBM家系、HBD家系），利用基于下一代測序技術(shù)和外顯子捕獲技術(shù)的耳聾基因組高通量測序（含已知的130個耳聾基因），未發(fā)現(xiàn)明確的致病基因，提示這兩個家系可能由一些少見的或未知的耳聾基因缺陷致聾，下一步可考慮進行全外顯子組測序。
　　結(jié)論:
　　1.由于遺傳性耳聾遺傳的異質(zhì)性，不同基因的突變可以導(dǎo)致同一種臨床表型;同一基因不同位點的突變可以導(dǎo)致不同的臨床表型，甚至是同一基因同一突變位點