成骨不全一家系突變基因檢測(cè)及其眼部特征初步分析.pdf

1、目的：檢測(cè)成骨不全一家系基因突變及初步探討其眼部特征. 方法：抽取17名家系成員外周血，提取及鑒定其基因組DNA；選擇與已知致病基因緊密連鎖的微衛(wèi)星分子標(biāo)記，進(jìn)行等位基因共享分析和排除性分析；利用 LINKAGE軟件對(duì)基因分型結(jié)果進(jìn)行連鎖分析，利用Cyrillic 2.0軟件進(jìn)行單體型構(gòu)建：對(duì)候選區(qū)域進(jìn)行基因克隆，PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序；利用DHPLC對(duì)基因突變進(jìn)行鑒定；對(duì)已確認(rèn)的突變進(jìn)行生物信息學(xué)分析。對(duì)家系成員V：3進(jìn)

2、行詳細(xì)的眼部檢查，并測(cè)量部分眼部參數(shù)，包括：視力、眼壓、眼軸長(zhǎng)度、中央角膜厚度、角膜曲率。 結(jié)果：等位基因共享分析將致病基因定位于COLlAl(17q21.3-22.1)，并排除了COLlA2基因；單體型分析顯示微衛(wèi)星分子標(biāo)記D17S1293，D17Sl180，D17S1319，D17S788在家系患者中出現(xiàn)共享；連鎖分析顯示，在0=0時(shí)，致病基因與微衛(wèi)星D17S1180，D17S1319緊密連鎖(LOD值分別為2.91，2.2

3、0)；對(duì)COLIAl基因進(jìn)行測(cè)序，發(fā)現(xiàn)第2464位堿基(位于36號(hào)外顯子)由野生型C突變?yōu)門(C2464T)，所編碼的氨基酸由谷氨酰胺(Gin)變?yōu)榱私K止子(Q644X)利用DHPLC對(duì)該家系其他成員及100例正常人的COLIAl基因36號(hào)外顯子擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行鑒定，發(fā)現(xiàn)突變僅存在于患者，非患者及100例正常人中未檢測(cè)到突變。生物信息學(xué)分析顯示COLlAl基因644位氨基酸位點(diǎn)(谷氨酰胺)位于一個(gè)高度保守的區(qū)域。 臨床檢查發(fā)現(xiàn)家系成

4、員中所有患者鞏膜均呈淡藍(lán)色；家系成員V：3的眼部參數(shù)測(cè)量結(jié)果為：視力OD 20/10，OS 20/10；眼壓OD 14.7mrnHg，OS 18.3mmHg；角膜曲率OD K1 43.3D，K2 43.6D；OS K1 43.0D，K2 44.OD：眼軸長(zhǎng)度OD 24.03mm，OS 24.23mm；中央角膜厚度OD 434μm，OS 441μm。 結(jié)論 1．COLlAl基因Q644X突變可以導(dǎo)致成骨不全。 2．