一個Fabry病家系的GLA基因突變研究.pdf

1、目的:分析一個臨床診斷為Fabry病的家系成員及其對照的GLA基因突變位點和突變類型,并對突變基因進行蛋白質結構功能預測,初步闡明此突變所致Fabry病的可能機制,為Fabry病的診斷、治療和遺傳咨詢提供一定理論依據(jù)。
　　方法:通過調查問卷詳細記錄此Fabry病家系成員的臨床資料,包括發(fā)病年齡,發(fā)病癥狀,既往病史,家族史,生活質量等。對先證者父女二人及部分家系成員進行腦CT、心臟彩超、心電圖、肝腎功能、腹部B超、血常規(guī)、尿常規(guī)、

2、眼部以及一般體格檢查,并用干血片法測定α-半乳糖苷酶A(α-galA)的活性。采集家系成員及正常對照外周靜脈抗凝血,擴增GLA基因的7個外顯子及其鄰近區(qū)域,并對擴增產物進行純化測序。用Chromas、clustalx、SeqMan等軟件對測序結果進行比對,確定突變位點。通過HGMD和NCBI數(shù)據(jù)庫檢索,明確該突變是已知突變或己知SNP或是未見報道的新突變。如果為新的突變,在NCBIHomogene網(wǎng)站數(shù)據(jù)庫檢索,明確發(fā)生改變的氨基酸在不

3、同物種的GLA基因中的保守性,推測該突變的發(fā)生對蛋白質造成的可能影響。運用DNAStar及SWISS-MODEL網(wǎng)絡服務器,對突變后的GLA基因進行蛋白質二級結構及三級結構預測,初步闡明此Fabry病家系可能的發(fā)病機制,并進一步探討基因型與表現(xiàn)型的關系。
　　結果:該Fabry病家系共有成員26人,13人存在相關臨床癥狀,3名男性,10名女性。其中3名男性患者發(fā)病較早且較嚴重。女性患者中僅有兩名患者發(fā)病較重,一名表現(xiàn)為腎臟受累,另

4、一名表現(xiàn)為嚴重肢端疼痛,其余8名女性患者癥狀相對較輕;對該Fabry病家系的臨床資料分析表明該家系臨床表型為經(jīng)典型。對其GLA基因7個外顯子及其鄰近區(qū)域測序分析發(fā)現(xiàn)該家系共有一個基因突變,位于第5外顯子,突變類型為c.717_718delAA。對該突變基因編碼的蛋白質二級及三級結構預測發(fā)現(xiàn)該突變基因編碼為提前終止的截短蛋白,結構功能變化較大,因此c.717_718delAA為該家系的致病突變。在對照人群中發(fā)現(xiàn)了兩個GLA基因突變,一個為

5、位于第三內含子的小片段缺失g.7188_7192delCAGCC,另一個為位于第一外顯子的錯義突變G11A,其中G11A為新突變,可能影響α-GalA蛋白質的運輸和加工,此兩種突變是否為致病突變還有待研究。
　　結論:基因突變c.717_718delAA對蛋白質的結構功能影響較大,這與該家系成員的經(jīng)典型臨床表現(xiàn)相一致,為該Fabry病家系的致病突變;Fabry病家系女性患者臨床癥狀各不相同,酶活性測定具有診斷局限,基因檢測為確診F