MicroRNA-195在食管癌中的作用及相關(guān)機(jī)制研究.pdf

1、[目的]：研究miR-195在食管鱗狀細(xì)胞癌組織與癌旁正常組織中表達(dá)情況的差異及其與年齡、性別、分化程度、腫瘤位置、腫瘤浸潤(rùn)程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、疾病分期、家族史、吸煙史、飲酒史、患者預(yù)后的關(guān)系。在食管鱗癌細(xì)胞株中探索miR-195調(diào)控的靶基因和功能機(jī)制。
　　[方法]：提取食管鱗狀細(xì)胞癌組織標(biāo)本和癌旁正常組織標(biāo)本中的TotleRNA，應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(Real-time PCR)比較食管鱗狀細(xì)胞癌組織和癌旁正常組織標(biāo)本中

2、miR-195表達(dá)情況的差異;分析其與臨床病理特征的相關(guān)性。應(yīng)用脂質(zhì)體瞬時(shí)轉(zhuǎn)染方法對(duì)相對(duì)高表達(dá)miR-195的食管癌細(xì)胞株轉(zhuǎn)染miR-195抑制劑(miR-195inhibitor);相對(duì)低表達(dá)miR-195的食管癌細(xì)胞株轉(zhuǎn)染miR-195類似物(miR-195 mimic)，并同時(shí)設(shè)陰性對(duì)照組分別轉(zhuǎn)染miR-NCinhibitor和miR-NC mimic。Real-time PCR驗(yàn)證轉(zhuǎn)染48h后各轉(zhuǎn)染組miR-195表達(dá)情況，同時(shí)

3、檢測(cè)轉(zhuǎn)染48h后各轉(zhuǎn)染組中p21、cdc2和cyclin B1基因的變化;流式細(xì)胞儀檢測(cè)轉(zhuǎn)染48h后各轉(zhuǎn)染組中細(xì)胞周期的變化;Western blotting檢測(cè)轉(zhuǎn)染48h后各轉(zhuǎn)染組中P21、CDC2和Cyclin B1蛋白表達(dá)的變化。
　　[結(jié)果]
　　(1)94例食管鱗狀細(xì)胞癌組織標(biāo)本中，有45例(47.9％)出現(xiàn)了不同程度的miR-195表達(dá)下調(diào)，有10例(10.6％)出現(xiàn)了miR-195的表達(dá)上調(diào)，有39例(41.5

4、％)表達(dá)在正常范圍。食管鱗狀癌組織中miR-195的表達(dá)低于癌旁正常組織的miR-195的表達(dá)（P＜0.05)。
　　(2) miR-195表達(dá)降低與食管鱗癌患者的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和腫瘤分期存在相關(guān)性（P＜0.05）。
　　(3) miR-195表達(dá)降低的食管鱗狀細(xì)胞癌患者的無病生存期(DFS)較miR-195表達(dá)不降低的患者縮短(P＜0.01)。
　　(4) miR-195相對(duì)表達(dá)水平是影響食管鱗狀上皮細(xì)胞癌患者生存的獨(dú)立

5、因素（P＜0.05）。
　　(5)流式細(xì)胞儀檢測(cè)各轉(zhuǎn)染組細(xì)胞周期結(jié)果顯示:食管癌細(xì)胞Eca-109中轉(zhuǎn)染miR-195 inhibitor組的細(xì)胞周期G2/M期百分比較轉(zhuǎn)染miR-NC inhibitor組降低，但統(tǒng)計(jì)學(xué)無顯著差異(P＞0.05);食管癌細(xì)胞TE-13中轉(zhuǎn)染miR-195 mimic組的細(xì)胞周期G2/M期百分比較轉(zhuǎn)染miR-NC mimic組顯著升高，細(xì)胞周期阻滯在G2/M期（P＜0.05）。
　　(6) R

6、eal-time PCR檢測(cè)各轉(zhuǎn)染組基因表達(dá)情況結(jié)果顯示:食管癌細(xì)胞Eca-109中轉(zhuǎn)染miR-195 inhibitor組中p21基因表達(dá)較轉(zhuǎn)染miR-NC inhibitor組降低、cdc2基因表達(dá)較轉(zhuǎn)染miR-NCinhibitor組升高，但統(tǒng)計(jì)學(xué)均無顯著差異(P＞0.05)，cyclinB1基因較轉(zhuǎn)染miR-NC inhibitor組顯著升高（P＜0.05);食管癌細(xì)胞TE-13中轉(zhuǎn)染miR-195 mimic組中p21基因表達(dá)

7、較轉(zhuǎn)染miR-NC mimic組顯著升高，cdc2和cyclin B1基因表達(dá)較轉(zhuǎn)染miR-NC mimic組顯著下降(P＜0.05)。
　　(7) Western blotting檢測(cè)各轉(zhuǎn)染組中蛋白表達(dá)結(jié)果顯示:食管癌細(xì)胞Eca-109中轉(zhuǎn)染miR-195 inhibitor組中P21、CDC2和Cyclin B1蛋白表達(dá)較轉(zhuǎn)染miR-NC inhibitor組無明顯差異;食管癌細(xì)胞TE-13中轉(zhuǎn)染miR-195 mimic組中