胃癌中microRNA-195靶基因的確定及與化療增敏、臨床預(yù)后相關(guān)性的研究.pdf

1、[目的]
　　在我國，胃癌的死亡率較高，大約每小時(shí)會(huì)有20人因患胃癌去世遠(yuǎn)高于全球的平均水平[1]。早期胃癌不易被診斷，導(dǎo)致了胃癌的死亡率較高，同時(shí)在治療方面，進(jìn)展期胃癌也尚未發(fā)現(xiàn)十分有效的治療手段。因此進(jìn)一步探索胃癌的發(fā)生發(fā)展機(jī)制，通過實(shí)驗(yàn)創(chuàng)建有理論基礎(chǔ)的、全新的診治途徑是十分必要的。
　　近些年來被發(fā)現(xiàn)的MicroRNA(miRNA)，也被稱為微小RNA，屬于非編碼RNA分子中全新的一種。就當(dāng)前的研究觀點(diǎn)來看，Micro

2、RNA對(duì)腫瘤的發(fā)生以及發(fā)展產(chǎn)生調(diào)控作用是通過近于癌基因或抑癌基因等途徑進(jìn)行的。研究者們的關(guān)注焦點(diǎn)正越來越集中在與腫瘤發(fā)生發(fā)展相關(guān)的miRNA分子上。
　　本課題組在前期芯片分析篩選研究中發(fā)現(xiàn)在胃癌中有一個(gè)明顯下調(diào)的miR-195分子，既往研究顯示miRNA-195在肝癌、結(jié)直腸癌和非小細(xì)胞肺癌等腫瘤中發(fā)揮著非常重要的作用。提示miR-195很有可能通過調(diào)控靶基因來對(duì)腫瘤增殖通路進(jìn)行抑制或?qū)Φ蛲鐾愤M(jìn)行激活，進(jìn)而影響胃癌患者的療效和

3、預(yù)后。
　　本課題擬從胃癌中miR-195和靶基因的確定、對(duì)胃癌細(xì)胞增殖凋亡等細(xì)胞表型的影響、與化療藥物的療效和臨床預(yù)后的相關(guān)性分析等四個(gè)方面去探討miR-195與胃癌的規(guī)律性關(guān)系;為胃癌預(yù)后分層和臨床治療尋找新的靶點(diǎn)提供理論依據(jù)。
　　[方法]
　　對(duì)轉(zhuǎn)染后microRNA-195表達(dá)不同的細(xì)胞進(jìn)行RNA提取并逆轉(zhuǎn)錄，利用Real-time PCR方法進(jìn)一步驗(yàn)證胃癌中microRNA-195的表達(dá)情況;靶基因預(yù)測(cè)軟件

4、預(yù)測(cè)microRNA-195的靶基因，并通過雙熒光素及突變實(shí)驗(yàn)、Western Blot以及Real-time PCR等方法進(jìn)行驗(yàn)證;對(duì)細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染，通過流式細(xì)胞術(shù)對(duì)細(xì)胞凋亡作用進(jìn)行分析，通過劃痕實(shí)驗(yàn)及Transwell實(shí)驗(yàn)對(duì)其侵襲及遷移作用做出分析;利用順鉑處理細(xì)胞，比較microRNA-195的不同表達(dá)對(duì)細(xì)胞增敏的影響;對(duì)29例患者的臨床資料進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，分析microRNA-195表達(dá)改變對(duì)患者腫瘤的TNM分期、Borrmann分型、

5、血管侵襲以及生存期的影響。
　　[結(jié)果]
　　明確驗(yàn)證了microRNA-195在胃癌中的表達(dá)呈現(xiàn)明顯下調(diào)趨勢(shì);確認(rèn)了Akt3是microRNA-195的靶基因，在microRNA-195過表達(dá)的細(xì)胞中表達(dá)明顯降低;細(xì)胞實(shí)驗(yàn)表明，轉(zhuǎn)染后microRNA-195過表達(dá)的細(xì)胞的侵襲能力顯著下降，早期凋亡增加;microRNA-195的高表達(dá)對(duì)順鉑化療療效具有明顯增敏作用;PFS與OS在microRNA-195上調(diào)患者中明顯延長，